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青光安颗粒剂对体外培养小梁细胞凋亡相关基因产物和细胞外基质作用的研究

作　者: 曾红艳
导　师: 彭清华
学　校: 湖南中医药大学
专　业: 中西医结合眼科学
关键词: 青光安小梁细胞细胞培养细胞凋亡细胞外基质含药血清血清药理学指纹图谱
分类号: R285.5
类　型: 博士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

目的:1.研究分析青光安颗粒剂大鼠含药血清的指纹图谱的测定方法;2.建立小梁细胞的体外培养模型;3.初步探讨中药青光安颗粒剂含药血清对体外培养小梁细胞凋亡相关基因产物的作用机制;4.探讨青光安颗粒剂含药血清是否具有降低小梁细胞分泌细胞外基质的作用。方法:1.不同浓度青光安颗粒剂和益脉康片剂给3月龄SD大鼠灌胃,获取不同含药浓度的大鼠血清。2.采用色谱技术对给药前的药液成分与给药后血清中吸收成分的对比,测定青光安颗粒剂大鼠含药血清的指纹图谱;3.建立小梁细胞体外培养模型;4.在体外培养小梁细胞培养液中加入不同浓度的含药血清,继续培养24小时后,收集细胞后,采用流式细胞仪进行细胞凋亡中Bcl-2、Bax等凋亡蛋白的检查。5.在体外培养的第三代小梁细胞中加入不同浓度含药血清,培养24h后,采用放射免疫分析法测定培养液中透明质酸、层粘连蛋白、胶原蛋白Ⅲ型的含量。结果:1.成功获取中药的含药血清,并将其用于小梁细胞的体外培养。2.青光安在体内吸收后其含药血清色谱图与空白组有明显区别,与含药溶液组既有区别,又有相同的峰出现。而不同浓度的青光安含药血清的指纹图谱均出现相同的波峰,但各峰的面积均有不同。3.含药血清作用于体外培养的小梁细胞后,Bcl-2的表达随青光安含药浓度的增高而增高,Bax的表达随青光安含药浓度的增高而降低,青光安20倍组明显优于模型组和空白组(P＜0.01),青光安20倍组优于益脉康5倍组(P＜0.05),青光安10倍组与青光安5倍组、益脉康5倍组无显著性差异。4.含药血清组的培养液中胶原蛋白Ⅲ型、透明质酸和层粘连蛋白的浓度均明显低于空白对照组。结论:1.青光安在体内的代谢产物浓度随给药浓度的不同也有所不同,该指纹图谱的测定方法准确、重复性好;2.青光安含药血清能延缓小梁细胞的凋亡,对其有保护作用;3.青光安含药血清能降低小梁细胞分泌细胞外基质(透明质酸、胶原蛋白Ⅲ型和层粘连蛋白)。

全文目录

中文摘要  5-7
英文摘要  7-10
引言  10-11
材料与方法  11-19
  1.材料和试剂  11-12
  2.实验方法  12-19
    2.1 青光安颗粒剂含药血清的制备  12-13
    2.2 青光安颗粒剂含药大鼠血清指纹图谱的研究  13-14
    2.3 小梁细胞的体外培养实验  14-17
    2.4 青光安颗粒剂含药血清对体外培养小梁细胞的影响  17-19
      2.4.1 青光安颗粒剂含药血清对体外培养的小梁细胞Bcl-2、Bax影响的测定  17-18
      2.4.2 青光安颗粒剂含药血清对体外培养的小梁细胞细胞外基质影响的测定  18-19
结果与分析  19-32
  1.青光安颗粒剂含药大鼠血清的指纹图谱  19-25
  2.小梁细胞鉴定的结果  25-29
  3.青光安颗粒剂含药血清对体外培养的小梁细胞Bcl-2、Bax的影响  29-31
  4.青光安颗粒剂含药血清对体外培养的小梁细胞细胞外基质的影响  31-32
讨论  32-62
  1.青光眼小梁损害的相关病因病机研究  32-33
  2.中医对青光眼相关的研究  33-36
  3.青光安颗粒剂含药血清对体外培养小梁细胞凋亡的影响  36-47
    3.1 青光眼小梁细胞的凋亡  36-46
    3.2 青光安颗粒剂含药血清对体外培养的小梁细胞Bcl-2、Bax的影响  46-47
  4.青光安颗粒剂含药血清对体外培养小梁细胞细胞外基质的影响  47-51
    4.1 细胞外基质在青光眼发病机制中的作用  47-51
    4.2 青光安颗粒剂含药血清降低体外培养小梁细胞细胞外基质的分泌  51
  5.中药复方的血清药理学研究现状及本次指纹图谱测定的评价  51-55
  6.青光安颗粒剂含药血清对体外培养的小梁细胞保护机制探讨  55-61
    6.1 青光安颗粒剂的前期临床和实验研究基础  55-57
    6.2 青光安颗粒剂组成药物的功用及现代药理学研究  57-60
    6.3 青光安颗粒剂抗小梁细胞凋亡及降低小梁细胞外基质的作用机制探讨  60-61
  7.展望  61-62
结论  62-63
致谢  63-64
参考文献  64-69
综述  69-75
攻读博士学位期间发表的论文著作、科研情况  75

青光安颗粒剂对体外培养小梁细胞凋亡相关基因产物和细胞外基质作用的研究

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