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降钙素对IL-1β体外诱导培养的大鼠软骨细胞MAPKs信号通路影响的初步研究

作　者: 付小霞
导　师: 王文雅
学　校: 河北联合大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 骨性关节炎 降钙素 软骨细胞 基质金属蛋白酶-13 丝裂原活化蛋白激酶
分类号: R684
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的:本研究旨在观察降钙素(calcitonin,CT)对白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)诱导后大鼠早期骨性关节炎(osteoarthritis,OA)体外模型关节软骨细胞的丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinases,MAPKs)信号通路中的细胞外信号调节激酶(extracell-ular sigal-regulated protein kinase,ERK)和p38激酶(p38 kinase,p38)及其磷酸化水平和基质金属蛋白酶-13 (matrix metalloproteinase-13,MMP-13)表达的影响,探讨CT是否可以通过影响MAPKs信号通路蛋白的激活进而减少MMP-13产生,从而对OA软骨细胞损伤起到一定的预防作用。方法:1.软骨细胞的培养及鉴定:取健康SPF级1月龄Sprague-Dawley(SD)大鼠的膝关节表面软骨组织,经消化后培养软骨细胞。采用甲苯胺蓝染色法和Ⅱ型胶原(collagen typeⅡ,ColⅡ)免疫细胞化学方法鉴定软骨细胞。2.第2代软骨细胞在融合后分为6组:空白组(A组);给予DMEM培养液24h15min;IL-1β组(B组):先给予DMEM培养基24h后再加入10ng/mlIL-1β15min;CT低剂量预防组(C组):先给予含CT50ng/ml DMEM培养基24h后再加入10ng/mlIL-1β15min;CT高剂量预防组(D组) :先给予含CT500ng/mlDMEM培养基24h后再加入10ng/mlIL-1β15min;CT低剂量对照组(E组):给予含CT50ng/ml DMEM培养基24h15min ;CT高剂量对照组(F组):给予含CT500ng/mlDMEM培养基24h15min。免疫细胞化学方法和Western blot方法分别检测各组中MAPKs通路中的ERK和p38激酶及其磷酸化水平和MMP-13的表达情况。采用ANOVA方差分析进行组间均数比较,两两比较采用SNK检验,以P<0.05表示差异有统计学意义。结果:1.甲苯胺蓝染色:培养细胞呈异染性,证明培养的细胞为软骨细胞。2.用免疫细胞化学方法检测ColⅡ,培养细胞胞浆出现较强的棕黄色颗粒,证明培养的细胞为软骨细胞。3.免疫细胞化学结果:3.1 ERK1/2和P38 IOD值:各组ERK1/2和P38 IOD值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3.2 p-ERK1/2,p-P38和MMP-13 IOD值:B组p-ERK1/2,p-P38和MMP-13 IOD值高于其它各组,差异有统计学意义(P<0.05);C,D组p-ERK1/2,p-P38和MMP-13 IOD值低于B组而高于A,E,F组,差异有统计学意义(P<0.05);C,D组之间p-ERK1/2,p-P38和MMP-13 IOD值比较,差异无统计学意义(P>0.05);A,E和F组之间p-ERK1/2,p-P38和MMP-13 IOD值分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。4. Western blot结果:4.1 ERK1/2和P38 OD值:各组ERK1/2和P38 OD值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。4.2 p-ERK1/2,p-P38和MMP-13 OD值:B组p-ERK1/2,p-P38和MMP-13 OD值高于其它各组,差异有统计学意义(P<0.05);C,D组p-ERK1/2,p-P38和MMP-13 OD值分别低于B组而高于A,E,F组,差异有统计学意义(P<0.05);C,D组之间p-ERK1/2,p-P38和MMP-13 OD值比较,差异无统计学意义(P>0.05);A,E和F组之间p-ERK1/2,p-P38和MMP-13 OD值分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:降钙素可能通过部分抑制IL-1β诱导的大鼠膝关节软骨细胞中MAPKs通路相关蛋白激酶中ERK1/2和P38的激活,同时下调MMP-13的表达,对OA软骨细胞的损伤起到一定的预防作用。

全文目录


中文摘要  4-6
Abstract  6-9
英文缩写  9-10
前言  10-12
材料与方法  12-24
结果  24-32
讨论  32-39
小结  39-40
不足与展望  40-41
附图  41-49
参考文献  49-55
综述一 MAPKs 信号通路与基质降解蛋白酶在骨性关节炎相互作用机制  55-67
  参考文献  62-67
综述二 甲状旁腺激素和甲状旁腺激素相关蛋白在正常及骨性关节炎软骨中作用机制的研究进展  67-77
  参考文献  72-77
致谢  77-78
个人简历  78

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中图分类: > 医药、卫生 > 外科学 > 骨科学（运动系疾病、矫形外科学） > 关节疾病及损伤
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