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OPN对体外培养人OA软骨细胞MMP13表达的影响

作　者: 徐文硕
导　师: 雷光华
学　校: 中南大学
专　业: 外科学
关键词: 骨关节炎 基质金属蛋白酶13 骨桥蛋白 软骨细胞
分类号: R684.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的：采用骨桥蛋白干预体外培养的人骨关节炎软骨细胞,观察细胞生物学特性,检测细胞培养上清液中MMP13的水平,探讨骨桥蛋白参与人骨关节炎发病的可能机理。方法：1、采用Ⅱ型胶原酶消化法处理人关节软骨标本获取大量高纯度的软骨细胞,采用Ⅱ型胶原免疫组化法对其进行鉴定,台盼蓝染色法检测软骨细胞的存活率。2、正常关节软骨细胞(A组)和OA关节软骨细胞(B组)分别在空白和三种不同浓度OPN的干预作用下进行培养：A1组(正常软骨细胞空白对照组),A2组(正常软骨细胞2ng/ml OPN干预组),A3组(正常软骨细胞4ng/ml OPN干预组),A4组(正常软骨细胞6ng/ml OPN干预组), B1组(OA软骨细胞空白对照组),B2组(OA软骨细胞2ng/ml OPN干预组),B3组(OA软骨细胞4ng/ml OPN干预组),B4组(OA软骨细胞6ng/ml OPN干预组),MTT比色法检测细胞存活及生长情况；3、软骨细胞培养48小时后,应用ELISA法检测培养上清液中MMP13的水平。结果：1、原代人正常软骨细胞(A组)和OA软骨细胞(B组)存活率分别为(95±1.0)%和(95±1.0)%,无显著性差异(P>0.05)；2、加入OPN后倒置显微镜下观察各组细胞间贴壁情况无明显差别；细胞存活率分别为A1组(98±1.0)%；A2组(97±1.0)%；A3组(98±1.0)%；A4组(97.5±1.0)%；B1组(98.7±0.6)%；B2组(97.7±0.6)%；B3组(98±1.0)%；B4组(97.7±1.5)%；各组间无显著性差异(P>0.05)；3、软骨细胞培养上清液MMP13水平比较结果：OPN干预正常软骨细胞后各组间MMP13水平无显著性差异(P>0.05)。OPN干预OA软骨细胞后,B2组与B1组、B4组与B1组间比较MMP13表达有显著性差异(P<0.05),其他各组间无显著性差异(P>0.05)。结论：1、本实验观察到体外培养OA软骨细胞和正常软骨细胞存活率无差异。2、本实验观察到OPN对体外培养OA软骨细胞和正常软骨细胞存活率无明显影响。3、本实验观察到OPN不影响正常关节软骨细胞MMP13表达,2ng/ml和6ng/ml的OPN可以增强OA软骨细胞MMP13表达。

全文目录


摘要  4-6
ABSTRACT  6-10
缩略词  10-11
第一章 前言  11-13
第二章 材料与方法  13-21
  2.1 临床资料  13-15
  2.2 主要实验仪器  15
  2.3 主要试剂  15
  2.4 实验方法  15-20
  2.5 统计分析  20-21
第三章 结果  21-26
  3.1 体外培养人关节软骨细胞及鉴定  21-22
  3.2 OPN干预对正常软骨细胞和OA软骨细胞生长的影响  22-24
  3.3 软骨细胞培养上清液MMP13水平比较  24-26
第四章 讨论  26-30
  4.1 人软骨细胞的体外培养  26
  4.2 OPN对体外培养OA软骨细胞和正常软骨细胞存活率的影响  26-27
  4.3 OPN对正常软骨细胞与OA软骨细胞MMP13表达的影响  27-30
第五章 结论  30-31
参考文献  31-34
综述  34-50
  参考文献  44-50
致谢  50-52
攻读硕士期间的主要研究成果  52

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中图分类: > 医药、卫生 > 外科学 > 骨科学（运动系疾病、矫形外科学） > 关节疾病及损伤 > 关节炎
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