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血府逐瘀汤对外伤性视神经病变神经节细胞作用的实验研究

作　者: 崔红培
导　师: 庄曾渊
学　校: 中国中医科学院
专　业: 中西医结合临床
关键词: 血府逐瘀汤外伤性视神经病变视网膜神经节细胞逆行标记 FG GAP-43 ROCKⅡ
分类号: R276.7
类　型: 博士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的建立外伤性视神经病变(traumatic optic neuropathies,TON)大鼠模型,从视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)存活状态、组织形态学、轴突修复影响因素三个方面观察血府逐瘀汤及其拆方对TON大鼠RGCs的影响,探讨其部分作用机制,为临床用药提供客观依据和指导。方法1.以钳夹伤大鼠视神经为TON动物模型,观察血府逐瘀汤及其拆方对大鼠RGCs存活状态的影响,计算存活率,筛选血府逐瘀汤最佳组方。2.采用组织病理学技术观察血府逐瘀汤最佳组方干预后3天、1周、2周、4周,钳夹伤大鼠视网膜厚度和视神经超微结构变化。3.采用免疫组织化学方法观察药物干预后3天、1周、2周、4周,生长相关蛋白GAP-43(growth associated protein 43,GAP-43)、Rho激酶(rho-associated coiled-coilforming protein kinase,ROCKⅡ)在钳夹伤大鼠视网膜、视神经组织中的表达情况。视网膜表达强度以平均光密度(average optical density,AOD)表示,视神经表达强度以积分光密度(integrated optical density,IOD)表示。结果1.血府逐瘀汤对TON大鼠RGCs存活率的影响各组RGCs平均存活率分别为:蒸馏水组62.84%±10.96%;灯盏细辛组75.76%±8.87%;血府逐瘀汤全方组89.18%±10.59%;血府逐瘀汤活血组69.68%±5.26%;血府逐瘀汤理气组66.95%±9.12%。血府逐瘀汤全方组RGCs存活率明显高于其它各组(P<0.01),血府逐瘀汤全方为最佳方药。2.血府逐瘀汤对TON大鼠视网膜视神经组织形态学的影响(1)视网膜厚度①3天视网膜内层(retinal length,RL)、神经纤维层(nerve fiber layer,NFL)、节细胞层(ganglion cell layer,GCL)、内丛状层(inner plexiform layer,IPL)和内核层(inner nuclearlayer,INL):各组均增加,组间同层比较没有显著性差异(P>0.05)。②1周RL和IPL:各组继续增加,组问同层比较没有显著性差异(P>0.05);NFL:各组轻度降低,组间同层比较没有显著性差异(P>0.05);GCL:治疗组和阳性对照组降低,模型组增加,治疗组明显低于模型组(P<0.05);INL:各组轻度增加,治疗组明显低于模型组(P<0.05)。③2周RL、IPL和INL:各组继续增加,组间同层比较没有显著性差异(P>0.05);NFL:各组均降低,组间没有显著性差异(P>0.05);GCL:各组均增加,阳性对照组低于模型组(P<0.05),治疗组和模型组没有显著性差异(P>0.05)。④4周RL、NFL和INL:各组明显降低,组间同层比较没有显著性差异(P>0.05);GCL:各组厚度降低,治疗组和阳性对照组均高于模型组(P<0.05);IPL:各组明显降低,治疗组高于模型组、阳性对照组(P<0.05)。(2)视神经超微结构①3天:模型组、治疗组均可见髓鞘板层分离、崩解,轴膜回缩,或外凸卷曲;轴突数目减少,部分轴突崩解呈空泡状,或退变形似蜂窝状;微丝微管数目明显减少,线粒体肿胀,嵴间隙增宽,嵴模糊不清,或完全崩解、消失。②1周:模型组、治疗组均可见髓鞘板层分离范围进一步扩大,结构疏松,部分向内、外突起,泡状解离,出现大量崩解产物;部分神经纤维塌陷形成“洋葱样”小体;微丝微管数目进一步减少,排列紊乱,线粒体肿胀,数目减少。③2周:模型组、治疗组上述改变继续加重,髓鞘呈薄膜样结构,泡状解离,巨噬细胞内见含有大量髓鞘碎片的吞噬泡;部分轴突空虚透明;微丝微管数目继续减少,线粒体溶解消失。胶质细胞增生明显,核质浓缩成块,胞质更为疏松,大部分线粒体溶解消失,存在大量吞噬了髓鞘碎屑的溶酶体。④4周:模型组髓鞘板层结构有所修复,比正常明显变薄,结构疏松;部分轴突恢复,少量变性消失;微管、微丝及线粒体数目有所增多,但较正常减少,线粒体结构模糊。胶质细胞形态不规则,胞核呈不规则形,染色质固缩成块,胞质内线粒体增多,可见大量胶质纤维。治疗组髓鞘板层结构明显修复,较模型组增厚、致密;大量轴突逐渐恢复,电子密度增高;微管、微丝数目明显较模型组增多,分布均匀,线粒体结构清晰。胶质细胞形态基本正常,胞核呈圆形、椭圆形,染色质分布较模型组均匀,胞质内见大量胶质纤维。3.血府逐瘀汤对RGCs修复环境的影响(1) GAP-43在钳夹伤大鼠视网膜、视神经中的表达①正常大鼠:视网膜:表达微弱,主要集中于GCL。视神经:表达微弱。②3天:视网膜:各组表达均增强,组间没有显著性差异(P>0.05)。视神经:各组表达均明显增强,组间没有显著性差异(P>0.05)。③1周:视网膜:各组表达持续增强,治疗组AOD值明显高于模型组、阳性对照组(P<0.05)。视神经:模型组减弱,治疗组和阳性对照组增强,二者没有显著性差异(P>0.05),均高于模型组(P<0.05)。④2周:视网膜:各组表达均减弱,治疗组AOD值低于阳性对照组(P<0.05),和模型组没有显著性差异(P>0.05)。视神经:模型组减弱,治疗组和阳性对照组增强,二者没有显著性差异(P>0.05),均高于模型组(P<0.05)。⑤4周:视网膜:各组表达均减弱,治疗组高于模型组(P<0.05),和阳性对照组没有显著性差异(P>0.05)。视神经:各组表达均减弱,组间比较没有显著性差异(P>0.05)。(2) ROCKⅡ在钳夹伤大鼠视网膜、视神经中的表达①正常大鼠:视网膜:表达微弱,主要集中在GCL和IPL。视神经:表达微弱。②3天:视网膜:模型组和阳性对照组明显增强,治疗组减弱,AOD值明显低于模型组(P<0.05)、阳性对照组(P<0.05)。视神经:各组表达明显增强,治疗组IOD值低于模型组(P<0.05),和阳性对照组没有显著性差异(P>0.05)。③1周:各组表达均减弱,组间比较没有显著性差异(P>0.05)。视神经:各组表达明显减弱,治疗组IOD值明显低于模型组(P<0.05)、阳性对照组(P<0.05)。④2周:视网膜:各组表达较7天时增强,治疗组最弱,三组没有显著性差异(P>0.05)。视神经:模型组、阳性对照组轻度减弱,治疗组明显减弱,IOD值明显低于模型组(P<0.05)、阳性对照组(P<0.05)。⑤4周:视网膜:各组表达继续增强,治疗组最弱,AOD值明显低于模型组(P<0.05),和阳性对照组没有显著性差异(P>0.05)。视神经:各组表达均增强,治疗组IOD值明显低于模型组(P<0.05)、阳性对照组(P<0.05)。结论1.血府逐瘀汤全方能够明显提高TON大鼠RGCs存活率,优于单纯的活血药、理气药。2.血府逐瘀汤能够在一定时间一定程度上缓解TON大鼠视网膜组织水肿,延缓视网膜萎缩变薄,保护视神经超微结构,为轴浆运输功能的恢复提供物质基础和载体。3.血府逐瘀汤能在一定程度上增强组织中GAP-43的表达,同时,强烈抑制ROCKⅡ的表达,阻断Rho/ROCK信号转导通路,促进轴突修复。4.血府逐瘀汤对RGCs的保护体现在多个环节:提高RGCs存活率;维护、构建正常的组织结构;改善微环境,促进轴突修复。5.用玄府理论解释外伤性视神经病变的病因病机,据此建立活血开玄法和理气开玄法并用的治则,得到了良好印证,为该病的临床治疗提供了一个新的思路。

全文目录

中文摘要  6-10
英文摘要  10-16
综述  16-28
英文缩略语  28-30
前言  30-34
第一章血府逐瘀汤对TON大鼠神经节细胞存活率的影响  34-64
  第一节视网膜神经节细胞的逆行标记方法  34-42
    1 材料  34-35
    2 方法  35-37
    3 结果  37-39
    4 讨论  39-42
  第二节大鼠外伤性视神经损伤模型的建立  42-53
    1 材料  42-43
    2 方法  43-45
    3 结果  45-47
    4 讨论  47-53
  第三节血府逐瘀汤对TON大鼠神经节细胞存活率的影响  53-64
    1 材料  53
    2 方法  53-54
    3 结果  54-58
    4 讨论  58-64
第二章血府逐瘀汤对TON大鼠视网膜视神经病理形态学的影响  64-83
  第一节血府逐瘀汤对TON大鼠视网膜厚度的影响  64-76
    1 材料  64-65
    2 方法  65-67
    3 结果  67-73
    4 讨论  73-76
  第二节血府逐瘀汤对TON大鼠视神经超微结构的影响  76-83
    1 材料  76
    2 方法  76-77
    3 结果  77-79
    4 讨论  79-83
第三章血府逐瘀汤对轴突修复微环境的影响  83-108
  第一节血府逐瘀汤对TON大鼠视网膜视神经GAP-43表达的影响  83-96
    1 材料  83-84
    2 方法  84-86
    3 结果  86-91
    4 讨论  91-96
  第二节血府逐瘀汤对TON大鼠视网膜视神经ROCKⅡ表达的影响  96-108
    1 材料  96
    2 方法  96-97
    3 结果  97-103
    4 讨论  103-108
结语  108-109
参考文献  109-117
致谢  117-118
个人简历  118

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