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联苯双酯纳米脂质载体给药系统的实验研究

作　者: 冯飞飞
导　师: 张典瑞
学　校: 山东大学
专　业: 药剂学
关键词: 联苯双酯 纳米脂质载体 组织分布 药物动力学 药效学
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


研究制备一种新型的药物载体—纳米脂质载体(NLC),以联苯双酯为模型药物,以期提高药物的包封率、载药量,改变其体内分布。本课题采用现代靶向制剂技术,以联苯双酯(Bifendate, DDB)为模型药物,以具有良好生物相容性和生物可降解性的单硬脂酸甘油酯、硬脂酸和中链脂肪酸甘油酯混合脂质为载体材料,采用乳化蒸发—低温固化法制备联苯双酯纳米脂质载体(Bifendate-loaded nanostructured lipid carriers, DDB-NLC)。实验以包封率为主要考察指标,通过均匀设计法对处方工艺进行优化,确定最佳处方工艺,并系统的研究了DDB-NLC冻干粉针剂的制备、处方和工艺,考察了制剂的体外释放特点以及体内分布、药动学和体外药效学特征,以期通过肝靶向分布达到提高DDB治疗肝脏疾病的效果,降低其毒副作用的目的。通过均匀设计优化的最佳处方工艺为药脂比为3：20,液态脂质／固态脂质比为1：5,表面活性剂用量为450 mg,搅拌速度800 rmp,乳化温度为75℃。优化工艺操作简单,所制备的DDB-NLC包封率稳定,平均包封率(91.52±1.76)%,载药量为(12.07±0.17)%。透射电镜下观察所得纳米粒为类球形,纳米粒彼此不粘连,粒径分布的范围较窄,平均粒径为277.0nm, Zeta电位为-21.91mV, pH值为5.95左右。为提高所制备DDB-NLC的储存稳定性,本文进一步对所制得的DDB-NLC进行了冻干处理,以外观、色泽、再分散性为评价指标,将DDB-NLC混悬液制成冻干粉针剂,确定其冻干工艺为：在优化工艺下制备的联苯双酯纳米脂质载体中加入5%甘露醇作为支架剂,振摇使溶解,分装于10 ml西林瓶中,置-80℃的超低温冰箱中冷冻24 h,取出,然后迅速移入冷冻干燥机中,-40℃、0.10mbar条件下冻干48 h,即可得DDB-NLC的冻干品。质量评价结果表明冻干过程对药物的粒径、包封率、载药量及Zeta电位影响较小。对冻干品的DSC和X-射线衍射分析结果表明,制成纳米粒后药物已被载体包裹或吸附,不再是单纯的混合,药物不再以晶体结构存在,即DDB-NLC中形成了新的物相。用透析袋法对DDB-NLC冻干粉针剂的体外释药特性进行了研究,结果表明DDB-NLC的体外释药具有缓释制剂特征,可用一级动力学方程拟合,方程为Ln(100-Q)=-0.1951t +4.6128, r=0.9985.以DDB-NLC的外观、再分散性、含量和包封率等为指标,评价了DDB-NLC冻干针剂的初步稳定性,结果显示DDB-NLC冻干粉在室温(25℃左右)、冷藏条件(4℃左右)条件下放置三个月,其物理化学稳定性良好。本文采用HPLC法,分别测定了小鼠尾静脉注射DDB-Sol和DDB-NLC后在体内的组织分布情况,结果表明联苯双酯纳米脂质载体能够使DDB靶向浓集于吞噬细胞丰富的肝中,并明显延长DDB在肝中的作用时间,从而有利于提高DDB的治疗效果,具有重要临床意义。在药物动力学试验中,结果表明DDB-Sol与DDB-NLC的血药浓度-时间曲线有显著不同。以三室模型描述药物在体内的动态过程最合适,静脉注射DDB-Sol后,小鼠体内药物动力学方程为：C=0.79e-0.12t+142.6e-20.19t+0.164e-0.87t,主要药动学参数为T1/2α=0.034h,T1/2β=0.793h,MRT=1.573h,清除率CLs= 5.344 mg/kg/h/(μg/ml), AUC为4.678h·μg/ml,而静脉注射DDB-NLC冻干粉针剂后,小鼠体内药物动力学有明显改变,其药物动力学方程为：C=0.007e-0.099t+9.91e-7.66t+0.178e-0.10t,T1/2α、T1/2β均显著延长,分别为T1/2α=0.09h, T1/2β=6.846h,MRT增加为4.114h,清除率降低,CLS=2.836 mg/kg/h/(μg/ml), AUC则增至9.109h·μg/ml。分析结果可知,DDB-NLC能够显著延长DDB在小鼠体内的半衰期和体内滞留时间,AUC显著增高,清除率明显降低,说明将DDB制成DDB-NLC后,有助于提高药物的生物利用度,并发挥长效作用。以CC14损伤人肝细胞为模型,采用MTT法对细胞活性和增殖进行检测,研究联苯双酯不同浓度对抗肝损伤的作用。结果发现,联苯双酯纳米脂质载体能够增强CCl4肝损伤模型肝细胞的增殖能力。以联苯双酯为模型药物制备纳米脂质载体的研究目前国内外尚未见报道,本文的研究成果为难溶性药物注射剂的开发提供了思路,并对治疗肝病药物联苯双酯注射剂的临床开发应用有着重要的意义。

全文目录


中文摘要  13-16
ABSTRACT  16-19
符号说明  19-20
前言  20-29
第一部分 联苯双酯纳米脂质载体处方和制备工艺的研究  29-54
  一、材料与仪器  29-30
    1. 实验材料  29
    2. 实验仪器  29-30
  二、实验方法与结果  30-51
    1. 联苯双酯含量测定方法的建立  30-35
      1.1 标准溶液的制备  30
      1.2 检测波长的确定  30-31
      1.3 标准曲线的绘制  31-32
      1.4 精密度试验  32-33
      1.5 重复性试验  33
      1.6 回收率试验  33-35
      1.7 纳米脂质载体中联苯双酯的含量测定  35
    2. 包封率测定方法的建立  35-37
      2.1 回收率试验  35-37
      2.2 包封率及载药量的测定  37
    3. 联苯双酯纳米脂质载体制备工艺考察  37-51
      3.1 单因素考察联苯双酯纳米脂质载体的处方与工艺  37-46
        3.1.1 表面活性剂种类和用量的选择  37-39
          3.1.1.1 表面活性剂种类的选择  37-38
          3.1.1.2 表面活性剂用量的选择  38-39
        3.1.2 有机溶剂的选择  39
        3.1.3 脂质材料的选择  39-40
        3.1.4 两种固态脂质比例的选择  40-41
        3.1.5 药物/脂质比例的选择  41
        3.1.6 液态脂质占总脂质比例的选择  41-42
        3.1.7 助表面活性剂卵磷脂用量的选择  42
        3.1.8 相体积比的选择  42-43
        3.1.9 乳化温度的选择  43
        3.1.10 乳化时间的选择  43-44
        3.1.11 固化时间的选择  44
        3.1.12 搅拌速度的选择  44-45
        3.1.13 纳米乳液/冷却水比例的选择  45-46
      3.2 均匀设计优化DDB—NLC处方与工艺  46-48
        3.2.1 实验因素和水平的确定及实验表的排列  46-47
        3.2.2 结果处理与评价  47
        3.2.3 优化工艺  47-48
      3.3 DDB-NLC胶体溶液优化处方的验证及质量评价  48-51
        3.3.1 包封率和载药量  48
        3.3.2 DDB-NLC的表面形态观察  48-49
        3.3.3 DDB-NLC的粒径分布  49-50
        3.3.4 Zeta电位的测定  50
        3.3.5 pH值测定  50-51
        3.3.6. DDB-NLC胶体溶液初步稳定性考察  51
  三、讨论  51-54
第二部分 联苯双酯纳米脂质载体冻干粉针剂的研究  54-71
  一、材料与仪器  54
    1. 实验材料  54
    2. 实验仪器  54
  二、实验方法与结果  54-67
    1. 冻干工艺的确定  54-56
      1.1 冻干保护剂的评价方法  55
      1.2 冻干保护剂种类的选择  55-56
      1.3 冻干保护剂用量的选择  56
      1.4 冻干工艺  56
    2. DDB-NLC冻干针剂的质量评价  56-61
      2.1 外观及再分散性  56
      2.2 表面形态观察  56-57
      2.3 DDB-NLC冻干粉针剂的粒径分布  57-59
      2.4 包封率与载药量测定  59
      2.5 Zeta电位的测定  59
      2.6 DSC分析  59-60
      2.7 X-射线衍射分析  60-61
    3 DDB-NLC冻干品的体外释药特性研究  61-66
      3.1 色谱条件  61-62
      3.2 标准曲线  62
      3.3 精密度  62-63
      3.4 回收率  63-64
      3.5 体外释药特性研究  64-66
    4 联苯双酯纳米脂质载体冻干针剂初步稳定性考察  66-67
  三、讨论  67-71
第三部分 联苯双酯纳米脂质载体在小鼠体内的组织分布和药物动力学研究  71-92
  一、材料与仪器  71
    1. 实验材料  71
    2. 实验动物  71
    3. 实验仪器  71
  二、实验方法与结果  71-89
    1. 生物样本中联苯双酯含量测定方法的建立  71-76
      1.1 样品的处理方法  71-72
      1.2 色谱条件  72
      1.3 方法专属性考察  72-74
      1.4 DDB标准储备液的配制  74
      1.5 标准曲线的建立  74-75
      1.6 精密度实验  75
      1.7 回收率实验  75-76
    2. 动物实验  76-87
      2.1 分组及给药方法  76-77
      2.2 取样方法及取样点的设计  77
      2.3 体内分布研究  77-87
        2.3.1 组织分布测定结果  77-81
        2.3.2 体内分布特点  81-85
        2.3.3 靶向性评价  85-87
    3. 药物动力学研究  87-89
  三. 讨论  89-92
第四部分 联苯双酯纳米脂质载体体外药效学研究  92-97
  一、材料与仪器  92
    1. 细胞株和药物  92
    2. 实验材料  92
    3. 实验仪器  92
  二、实验方法与结果  92-95
    1. HL7702细胞的培养和冻存  92-93
    2. CCl_4肝细胞损伤模型的制备  93
    3. MTT比色法检测联苯双酯原料药和纳米脂质载体对CCl_4损伤HL7702细胞的保护作用  93
    4. MTT法测定不同浓度CCl_4对HL7702细胞的损伤结果  93-94
    5. 联苯双酯纳米脂质载体对四氯化碳损伤人肝细胞的保护作用  94-95
  三、讨论  95-97
全文结论  97-99
参考文献  99-105
致谢  105-106
攻读学位期间发表论文目录  106-108
学位论文评阅及答辩情祝表  108

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中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药理学
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