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山豆根多糖提取工艺及免疫学活性研究

作　者: 帅学宏
导　师: 胡庭俊；刘英
学　校: 甘肃农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 山豆根多糖 分离提取 免疫调节 活性氧 信号转导
分类号: S853.7
类　型: 博士论文
年　份: 2010年
下　载: 418次
引　用: 4次
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内容摘要


山豆根为我国传统中药,具有多方面的药理作用和生物活性。本论文进行了山豆根多糖(SSP)的分离提取,优化了提取工艺路线,制定出了山豆根多糖原料药质量标准,并通过实验研究探讨了山豆根多糖的药理活性及其作用机制。主要研究内容如下:微波提取法确定山豆根粗多糖的最佳提取条件为:料液比1:15,提取温度90℃,提取时间90 min,上述条件下山豆根粗多糖得率为5.54%,总糖含量为65.41%,精制后的多糖中总糖含量达88.48%。质量标准方面,单糖含量、干燥失重、重金属含量、蛋白质含量等均符合《中华人民共和国药典》规定,精制后的多糖采用红外光谱扫描表现出多糖的特征吸收峰。观察了不同剂量的山豆根多糖对小鼠免疫器官组织中自由基及自由基产生酶活性的影响,探讨了山豆根多糖的自由基药理作用及抗氧化作用。利用地塞米松(Dex)建立免疫抑制模型,观察了山豆根多糖对免疫功能低下小鼠血清溶菌酶(LZM),白介素-6(IL-6),白介素-10(IL-10),白介素-12(IL-12),干扰素-γ(IFN-γ)含量的影响。采用体外培养小鼠脾脏淋巴细胞的方法,观察了山豆根多糖对小鼠脾脏淋巴细胞分泌白介素-4(IL-4)和干扰素-γ(IFN-γ)的影响。观察了不同剂量的山豆根多糖对鸡脾脏淋巴细胞内环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷(cAMP/cGMP)水平及分泌6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)、血栓素B2(TXB2)和一氧化氮(NO)的影响,探讨山豆根多糖对鸡免疫细胞信号转导相关分子的调节作用。以不同剂量的山豆根多糖给鸡一次性胸部肌肉注射,观察了不同时间段鸡体内活性氧水平及抗氧化能力。结果表明:地塞米松按剂量1.25 mg/kg体重于1d、3d、5d皮下注射能引起小鼠免疫功能显著下降,复制出免疫功能低下模型。山豆根多糖能拮抗由地塞米松所引起的小鼠脾脏指数的下降,增强机体免疫功能;山豆根多糖通过提高机体免疫器官抑制羟自由基能力,降低髓过氧化物酶活性、抑制黄嘌呤氧化酶的活性等途径来影响机体内活性氧自由基的产生与消除,并通过升高还原型谷胱甘肽水平、增强谷胱甘肽过氧化物酶活性而调节机体的氧化还原平衡。山豆根多糖能够增加小鼠血清中溶菌酶的含量,增强机体的抗菌能力,通过调节白IL-6、IL-10和IL-12来影响机体的免疫功能。山豆根多糖对体外培养的小鼠脾脏淋巴细胞产生的细胞因子IL-4及IFN-γ的含量无显著影响,故其对Thl/Th2细胞之间的免疫平衡影响不显著,但在有ConA存在的条件下,山豆根多糖可协同ConA使IFN-γ含量显著上升,使得Thl/Th2增加,从而增强机体的细胞免疫反应和抗病毒活性,达到免疫调节的作用。山豆根多糖在体外能显著升高鸡脾脏淋巴细胞内cAMP水平、促进6-keto-PGF1α和TXB2分泌,调节鸡脾脏淋巴细胞cAMP/cGMP和6-keto-PGF1α/TXB2信号体系。山豆根多糖对鸡胸腺指数、脾脏指数、法氏囊指数均有升高作用,并通过调节机体总抗氧化能力、超氧化物歧化酶活力、还原型谷胱甘肽和一氧化氮的水平从而影响鸡的抗氧化能力和免疫功能。结论(1)山豆根多糖提取方法以微波法较好,最适条件为料液比1:15,提取温度90℃,提取时间90 min。建立了山豆根多糖的质量标准。(2)山豆根多糖通过影响小鼠体内活性氧水平及其相关酶的活性,调节机体的抗氧化能力。(3)山豆根多糖通过升高小鼠血清中溶菌酶的水平,调节淋巴因子水平影响机体的免疫功能。(4)山豆根多糖协同ConA使IFN-γ含量显著上升,从而增强机体的细胞免疫反应活性。(5)山豆根多糖通过影响免疫细胞内的信号转导分子cAMP、cGMP、6-keto- PGF1α、TXB2而调节机体的免疫功能。(6)山豆根多糖对鸡体内抗氧化能力具有调节作用。

全文目录


摘要  8-10
Abstract  10-12
综述  12-23
引言  23-26
第一章 山豆根多糖的分离提取工艺及质量标准  26-34
  1. 目的  26
  2. 材料  26-27
  3. 方法  27-30
    实验一 山豆根多糖水提醇沉法  27
    实验二 山豆根多糖微波处理法  27
    实验三 山豆根多糖的的精制  27-28
    实验四 山豆根多糖的总糖含量测定  28
    实验五 山豆根多糖的理化性质  28-29
    实验六 山豆根多糖的红外光谱分析  29
    实验七 山豆根多糖质量标准的建立  29-30
  4. 结果  30-33
    4.1 山豆根粗多糖的提取率  30
    4.2 山豆根多糖的总糖含量  30-31
    4.3 山豆根多糖的理化性质及红外光谱  31-32
    4.4 山豆根多糖的质量标准验证结果  32-33
  5. 讨论  33
  6. 小结  33-34
第二章 山豆根多糖对小鼠免疫功能的调节作用  34-46
  1. 目的  34
  2. 材料  34-35
  3. 方法  35-37
    3.1 实验动物的分组及处理  35
    3.2 小鼠脾脏淋巴细胞的采集和分组处理  35-36
    3.3 检测方法  36-37
    3.4 统计学处理  37
  4. 结果  37-42
    4.1 山豆根多糖对小鼠溶菌酶活力的影响  37-38
    4.2 山豆根多糖对小鼠白介素-6 水平的影响  38
    4.3 山豆根多糖对小鼠血清中 IL-10 含量的影响  38-39
    4.4 山豆根多糖对小鼠血清中 IL-12 含量的影响  39
    4.5 山豆根多糖对小鼠血清中干扰素-γ含量的影响  39-40
    4.6 山豆根多糖对小鼠脾脏淋巴细胞分泌白介素-4 的影响  40
    4.7 山豆根多糖对小鼠脾脏淋巴细胞分泌干扰素-γ的影响  40-42
  5. 讨论  42-45
  6. 小结  45-46
第三章 山豆根多糖对小鼠免疫器官活性氧水平的影响  46-62
  1. 目的  46
  2. 材料  46
  3. 方法  46-51
    3.1 活性氧自由基的测定  46-49
    3.2 免疫器官活性氧产生相关酶的测定  49-51
    3.3 分析  51
  4. 结果  51-56
    4.1 山豆根多糖对小鼠胸腺指数和脾脏指数的影响  51-52
    4.2 山豆根多糖对小鼠胸腺抑制羟自由基能力的影响  52-53
    4.3 山豆根多糖对小鼠胸腺过氧化氢水平的影响  53
    4.4 山豆根多糖对小鼠胸腺抗超氧阴离子能力的影响  53-54
    4.5 山豆根多糖对小鼠胸腺还原型谷胱甘肽水平的影响  54
    4.6 山豆根多糖对小鼠脾脏一氧化氮水平的影响  54-55
    4.7 山豆根多糖对髓过氧化物酶活力的影响  55
    4.8 山豆根多糖对黄嘌呤氧化酶活力的影响  55-56
    4.9 山豆根多糖对谷胱甘肽过氧化物酶活力的影响  56
  5. 讨论  56-61
  6. 小结  61-62
第四章 山豆根多糖对鸡免疫细胞信号转导相关分子的影响  62-71
  1. 目的  62
  2. 材料  62
  3. 方法  62-65
    3.1 鸡脾脏淋巴细胞的制备和体外培养  62-63
    3.2 测定方法  63-65
    3.3 统计学处理  65
  4. 结果  65-69
    4.1 山豆根多糖对鸡脾脏淋巴细胞内cAMP 含量的影响  65-66
    4.2 山豆根多糖对鸡脾脏淋巴细胞内cGMP 含量的影响  66-67
    4.3 山豆根多糖对鸡脾脏淋巴细胞内cAMP/cGMP 的影响  67
    4.4 山豆根多糖对鸡脾脏淋巴细胞产生6-keto-PGF1α的影响  67-68
    4.5 山豆根多糖对鸡脾脏淋巴细胞产生 TX82 的影响  68
    4.6 山豆根多糖对鸡脾脏淋巴细胞6-keto-PGF1α/TX82 的影响  68-69
    4.7 山豆根多糖对鸡脾脏淋巴细胞分泌 NO 的影响  69
  5. 讨论  69-70
  6. 小结  70-71
第五章 山豆根多糖对鸡免疫器官发育和抗氧化能力的影响  71-79
  1. 目的  71
  2. 材料  71
  3. 方法  71-73
    3.1 实验分组及动物处理  71
    3.2 免疫器官指数的测定  71-72
    3.3 鸡血浆总抗氧化能力的测定  72
    3.4 鸡血浆丙二醛的测定  72
    3.5 鸡血浆总超氧化物岐化酶活力的测定  72-73
    3.6 鸡血浆 GSH 的测定  73
    3.7 鸡血浆 NO 的测定  73
  4. 结果  73-75
    4.1 山豆根多糖对鸡免疫器官指数的影响  73-74
    4.2 山豆根多糖对鸡血浆中活性氧自由基及酶活性的影响  74-75
  5. 讨论  75-78
  6. 小结  78-79
参考文献  79-93
致谢  93-94
作者简介  94-96
导师简介  96

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