学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

绵羊卵母细胞差异蛋白质组学研究

作　者: 林雍峰
导　师: 赵兴绪
学　校: 甘肃农业大学
专　业: 临床兽医学
关键词: 绵羊 卵母细胞 核成熟 卵丘扩展 激素浓度 质谱 蛋白质组学
分类号: S826
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 19次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


绵羊卵母细胞差异蛋白质组学研究主要利用蛋白质组学方法从整体水平对卵母细胞成熟过程中蛋白质的组成和表达差异进行研究,为绵羊卵母细胞成熟的分子机制研究提供理论基础。论文主要分为四部分:文献综述;绵羊卵母细胞蛋白质组2-DE图谱的建立和初步分析;绵羊卵母细胞核成熟、卵丘扩展和激素浓度关系的研究;绵羊卵母细胞差异蛋白质组学研究。将绵羊GV期卵母细胞溶于裂解液后,采用Bradford法和Ramagli法对绵羊卵母细胞蛋白质样品的浓度进行测定,并使用PDQuest8.0对2-DE图谱运用进行初步分析。采用激素培养法获取成熟的绵羊卵母细胞,并设计不同激素浓度,观察卵母细胞核成熟率和卵丘扩展率。在获得MⅡ期卵母细胞的2-DE图谱后,找出表达发生变化的蛋白斑点,并对其进行质谱分析。实验表明:Bradford法在测定绵羊卵母细胞蛋白质样品浓度时较Ramagli法高,Ramagli法定量的180μg蛋白即700个卵母细胞的上样量所得2-DE图谱较清晰;E2可显著(P<0.05)提高卵母细胞核成熟率,但并不影响卵丘扩展率;E2可显著(P<0.05)提高卵丘扩展的卵母细胞成熟率,但不影响卵丘未扩展的卵母细胞核成熟率;卵母细胞核成熟和卵丘扩展之间没有相互依赖的关系,但在一定激素浓度条件下卵母细胞核成熟率和卵丘扩展率成正比;绵羊卵母细胞从GV期到MⅡ期有28个蛋白斑点表达存在明显差异,其中下调11个,上调17个;4个蛋白斑点的质谱检测结果较为理想,并对应着3种不同蛋白质,它们是截短的VP2、苹果酸脱氢酶、谷胱甘肽转移酶M3;其中截短的VP2和苹果酸脱氢酶在卵母细胞核成熟过程中表达量下调;谷胱甘肽转移酶M3在绵羊卵母细胞中大量表达,并在其核成熟过程中表达量上调。从实验结果可以得出:Ramagli法在测定绵羊卵母细胞蛋白质样品浓度时更准确,700个卵母细胞的上样量可以用于绵羊卵母细胞2-DE图谱的构建;E2对绵羊卵母细胞核成熟的调节作用可能不由卵丘细胞介导,而是直接作用于卵母细胞;绵羊卵丘扩展可能与卵丘细胞自回分泌的卵丘扩展因子有关;在激素浓度一定的条件下,绵羊卵丘扩展率可以作为卵母细胞核成熟率的判定标准;卵母细胞从GV期到MII期,细胞的mRNA合成和表达水平以及糖代谢水平可能降低,细胞的抗氧化和解毒能力可能提高。实验为绵羊卵母细胞成熟的分子机制研究提供了理论依据。

全文目录


摘要  2-3
Summary  3-8
缩略语表  8-9
文献综述  9-16
  1 卵母细胞的成熟调节  9-10
  2 蛋白质组学在卵母细胞研究中的意义  10
  3 卵母细胞蛋白质组学研究进展  10-14
    3.1 转录和翻译相关蛋白  11-12
    3.2 代谢活动相关蛋白  12
    3.3 保护蛋白  12-13
    3.4 蛋白伴侣分子  13
    3.5 蛋白质的翻译后修饰  13-14
  4 卵母细胞蛋白质组学研究的挑战及展望  14-16
实验1 绵羊卵母细胞蛋白质组2-DE 图谱的构建及初步分析  16-26
  1 材料与方法  16-22
    1.1 试剂与仪器  16
    1.2 主要溶液配制  16-18
    1.3 样品的采集  18-19
    1.4 蛋白质样品的制备  19
    1.5 蛋白质样品的定量  19-20
      1.5.1 Bradford 法  19-20
      1.5.2 Ramagli 法  20
    1.6 双向电泳  20-22
      1.6.1 IEF 电泳  20-21
      1.6.2 SDS-PAGE 电泳  21-22
    1.7 凝胶染色和图像分析  22
  2 实验结果  22-24
    2.1 蛋白质样品定量结果  22-23
    2.2 2-DE 图谱分析结果  23-24
    2.3 Ramagli 法与Bradford 法的比较结果  24
  3 讨论  24-26
实验2 绵羊卵母细胞核成熟、卵丘扩展和激素浓度关系的研究  26-34
  1 材料与方法  26-29
    1.1 试剂与仪器  26
    1.2 主要溶液配制  26-27
    1.3 细胞培养皿的制备  27
    1.4 COCs 的采集  27
    1.5 卵母细胞体外成熟培养  27-28
    1.6 卵丘扩展分级  28
    1.7 卵母细胞成熟判定  28
    1.8 数据分析  28-29
  2 结果与分析  29-32
    2.1 卵母细胞培养结果  29-30
    2.2 E2 对卵母细胞成熟率和卵丘扩展率的影响  30-31
    2.3 FSH/LH 对卵母细胞成熟率和卵丘扩展率的影响  31-32
    2.4 卵丘扩展与卵母细胞核成熟的关系  32
  3 讨论  32-34
实验3 绵羊卵母细胞差异蛋白质组学研究  34-45
  1 材料与方法  34-37
    1.1 试剂与仪器  34
    1.2 主要溶液配制  34-35
    1.3 GV 期和MⅡ期卵母细胞的收集  35
    1.4 蛋白质样品的制备  35
    1.5 蛋白质样品的定量  35
    1.6 双向电泳  35
      1.6.1 IEF 电泳  35
      1.6.2 SDS-PAGE 电泳  35
    1.7 凝胶染色和图像分析  35-36
    1.8 质谱检测  36-37
      1.8.1 切胶  36
      1.8.2 脱色  36
      1.8.3 酶解  36
      1.8.4 离子阱质谱检测  36
      1.8.5 数据库查询  36-37
  2 结果  37-42
    2.1 绵羊GV 期和MⅡ期卵母细胞蛋白差异表达分析结果  37
    2.2 质谱分析结果  37-42
  3 讨论  42-45
    3.1 截短的VP2  42
    3.2 苹果酸脱氢酶  42-43
    3.3 谷胱甘肽转移酶M3  43-44
    3.4 质谱结果不理想的原因分析  44-45
结论  45-46
参考文献  46-54
致谢  54-55
作者简介  55-56
导师简介  56-57

相似论文

  1. 天然迈克尔反应受体分子的快速发现及活性研究,R284
  2. 松萝酸与依托红霉素致肝脏毒性的GC-MS代谢组学研究,R965
  3. 微波加热焚烧法处理沥青烟气的研究,X701
  4. 棉花纤维初始发育的磷酸蛋白质组学研究,S562
  5. 烟草花粉管内吞作用机制的细胞学和蛋白质组学研究,Q942
  6. 溶藻弧菌耐四种抗生素的蛋白质组学研究,S941
  7. 蛋膜固相萃取在环境水样微量金属元素分析中的应用,X832
  8. 碳纳米材料在痕量元素分离富集与分析中的应用研究,TB383.1
  9. 除草剂溴苯腈与硝磺草酮在玉米和土壤中的残留研究,S481.8
  10. 甘蓝型油菜种质资源芽期和苗期耐盐性鉴定与双向电泳体系的建立,S565.4
  11. 副猪嗜血杆菌的分离鉴定及其在模拟体内发病条件下培养的蛋白组学研究,S858.28
  12. 组蛋白H2A变异体在小鼠卵母细胞和早期胚胎发育过程中的变化,S865.13
  13. 免疫共沉淀联合质谱筛选肝核因子HNF3β相互作用蛋白质及初步功能研究,R341
  14. 液相色谱串联质谱法测定动物源性食品中β2-肾上腺素激动剂方法的研究,TS207.3
  15. 陆地棉细胞质雄性不育及其恢复机制的研究,S562
  16. 卵丘细胞对猪卵母细胞成熟及其发育能力的影响,S828
  17. LC-MS/MS法研究黄体酮乳膏剂在Beagle犬体内的药物动力学,R96
  18. 食品包装纸中有害化学物的分析测定及迁移研究,TS206.4
  19. 抗生素干预小鼠及菌群相关疾病患者肠道菌群蛋白组分研究,R446.5
  20. 基质固相分散技术在食品农药残留分析中应用的研究,TS207.53
  21. 聚乙烯塑料食品包装材料中有毒有害物质的测定及迁移研究,TS206.4

中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 家畜 > 羊
© 2012 www.xueweilunwen.com