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枯草芽孢杆菌JS01对荧光假单胞菌感染鲤免疫和生长性能的影响

作　者: 但言
导　师: 曾东；倪学勤
学　校: 四川农业大学
专　业: 水产养殖
关键词: 益生菌枯草芽孢杆菌荧光假单胞菌感染鲤免疫生长
分类号: S941
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

本试验选择一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis JS01)作为益生菌株,一株荧光假单胞菌(Pseudomonas fluoroscens 56-12-10)作为病原菌,研究枯草芽孢杆菌对荧光假单胞菌感染鲤生长性能和免疫功能的影响。选用初始体重10±0.2g健康鲤,共840尾,随机分为7组每组3重复,其中第1组为正常对照,感染组为第2至7组,在试验开始时正常对照组注射无菌生理盐水,感染组腹腔注射荧光假单胞菌(1.5×108CFU/mL,0.1 mL)。第1、2组饲喂无枯草芽孢杆菌的基础日粮；第3、4、5、6和7组分别饲喂添加0.05‰、0.25‰、0.50‰、0.75‰和1.00‰枯草芽孢杆菌日粮。在流水环境中进行为期6周试验,分别在14d、28d、42d采样检测各组鲤生长性能、器官发育、消化吸收功能、血清免疫和肠道菌群。试验结果：1、存活率的变化：注射感染荧光假单胞菌后,感染鲤表现赤皮病病理变化并出现不同程度死亡,感染组存活率显著低于对照组(P<0.05),而饲喂枯草芽孢杆菌JS01对感染鲤存活率无显著影响(P>0.05)。2、生长性能的变化：与正常组相比,感染鲤生长性能下降,第2组鲤末质量、增重率、特定生长率、绝对生长率在整个试验期都极显著低于正常组(P<0.01)。日粮中添加枯草芽孢杆菌后感染鲤生长性能提高,在第4、5组生长性能达到峰值。第4组在整个试验期的末质量、增重率、绝对生长率都极显著高于第2组(P<0.01)；特定生长率极显著(14d、42d)或显著(28d)高于第2组；第5组增重率、特定生长率和绝对生长率在整个试验期均极显著高于第2组(P<0.01),末质量极显著(42d)或显著(14d、28d)高于第2组。同时试验结果还表明饲料中添加大剂量枯草芽孢杆菌JS01对感染鲤生长性能改善作用减弱,第6、7组在添加了大剂量枯草芽孢杆菌后生长性能比第4、5组下降。结果表明饲喂适量枯草芽孢杆菌JS01可改善感染鲤生长性能。3、肌肉基本成分的变化：与正常组比较,感染鲤肌肉中粗蛋白含量显著降低(P<0.05),粗脂肪和水分含量显著升高(P<0.05)。饲喂添加不同剂量枯草芽孢杆菌日粮后,感染鲤肌肉粗蛋白含量上升,水分和粗脂肪含量下降。第5组在整个试验期内肌肉粗蛋白含量均显著高于第2组(P<0.05),而水分含量和粗脂肪含量较第2组低,并在14d达到显著差异(P<0.05)。此外各组鲤肌肉粗灰分含量接近,没有显著差异(p>0.05)。说明枯草芽孢杆菌可改善感染鲤肌肉基本成分,提高肌肉中营养成分沉积。4、消化系统的变化：(1)消化器官：鲤感染荧光假单胞菌后,消化器官发育受阻,整个试验期肠总长、肠长指数和肠道蛋白含量均显著下降(P<0.05),肝体指数显著低于正常组(P<0.05),中肠皱褶高度极显著下降(P<0.01),皱褶断裂增多。饲喂枯草芽孢杆菌后感染鲤肠道发育得到改善,第5组肠道蛋白在14d和28d时显著高于第2组(P<0.05),肠总长和肠长指数在整个试验期均显著高于第2组(P<0.05),第5组肝体指数和肝胰蛋白含量在整个试验期间显著高于第2组(P<0.05),中肠皱褶高度极显著高于第2组(P<0.01)；(2)消化酶活：感染荧光假单胞菌后,鲤消化酶活显著下降,与正常组相比,整个试验期内第2组淀粉酶活极显著下降(P<0.01),糜蛋白酶活显著下降(P<0.05)；第2组胰蛋白酶活和糜蛋白酶活在14d和28d显著下降(P<0.05)。饲喂枯草芽孢杆菌后,消化酶活相比感染组均有提升,第5组淀粉酶活力在14d显著高于第2组(P<0.05),28d和42d极显著高于第2组(P<0.01)。第5组胰蛋白酶活在整个试验期均显著高于第2组(P<0.05),第5组糜蛋白酶活28d和42d显著高于第2组(P<0.05)。结果表明饲喂枯草芽孢杆菌JS01可提高感染荧光假单胞菌鲤的消化和吸收能力。5、免疫器官的变化：荧光假单胞菌感染鲤免疫器官指数下降,饲喂枯草芽孢杆菌JS01能改善感染鲤免疫器官发育,头肾、中肾和脾体指数均有提高,但差异均不显著(p>0.05)。6、血液免疫的变化：感染荧光假单胞菌鲤血液中红细胞数量下降,饲喂枯草芽孢杆菌JS01后红细胞数量上升,第4、5组血液红细胞数量最高,各处理组之间无统计学差异；感染组与正常对照组间白细胞数量无差异,饲喂枯草芽孢杆菌组白细胞数量上升,与第1、2组相比,第3、5组显著提高(P<0.05),第4组极显著提高P<0.01)；感染鲤溶菌酶活下降,饲喂枯草芽孢杆菌后溶菌酶活提高,第5组溶菌酶活在整个试验期内均显著高于第2组(P<0.05)；感染鲤血清补体C3活力与正常组相比显著下降(P<0.05),饲喂枯草芽孢杆菌可提高血清补体C3活力,第6组在整个试验期均显著高于第2组(P<0.05)；感染鲤血清补体C4活力下降,在14d和28d达到显著差异(P<0.05),第5组在整个试验期均显著高于第2组(P<0.05)。说明饲喂芽孢杆菌能提高感染鲤血液免疫功能。7、肠道菌群变化：感染荧光假单胞菌后,鲤肠道大肠杆菌和嗜水气单胞菌数量上升,乳酸杆菌和芽孢杆菌数量下降,但差异不显著(P>0.05)。添加枯草芽孢杆菌JS01可以改善感染鲤肠道微生物组成,在整个试验期内第5、6组嗜水气单胞菌和大肠杆菌数量极显著下降(P<0.01),乳酸杆菌和芽孢杆菌数量极显著上升(P<0.01),显著改善了肠道B/E值。说明枯草芽孢杆菌能稳定而持久的改善感染鲤肠道菌群。8、枯草芽孢杆菌的最适添加剂量：通过对枯草芽孢杆菌JS01与感染荧光假单胞菌鲤生长、·消化、免疫、肠道菌群的回归分析,得出荧光假单胞菌感染鲤饲料中枯草芽孢杆菌JS01的最佳添加剂量为0.40‰-0.56‰。

全文目录

摘要  4-7
Abstract  7-13
第一部分文献综述  13-22
  1 水生动物益生菌的概念与种类  13-14
    1.1 水生动物益生菌的概念及发展  13-14
    1.2 益生菌的种类  14
  2 芽孢杆菌及其在水生动物上的应用  14-21
    2.1 芽孢杆菌  14-16
    2.2 芽孢杆菌对水生动物生产性能的影响  16
    2.3 芽孢杆菌对水生动物消化酶活的影响  16-17
    2.4 芽孢杆菌对水生动物肠道结构的影响  17
    2.5 芽孢杆菌对水生动物肠道菌群的影响  17-18
    2.6 芽孢杆菌对水生动物免疫的影响  18-21
  3 存在的问题及试验的目的意义  21-22
第二部分试验研究  22-64
  1. 试验材料  22-23
    1.1 试验菌株  22
    1.2 试验试剂  22-23
    1.3 试验仪器  23
  2. 菌种的活化、培养与攻毒菌液准备  23-24
    2.1 培养基的准备  23-24
    2.2 感染菌液准备  24
    2.3 芽孢杆菌菌粉制备  24
  3. 动物试验设计  24-30
    3.1 试验动物  24
    3.2 饲养场地  24
    3.3 试验分组  24-25
    3.4 试验日粮  25
    3.5 试验条件及管理  25
    3.6 感染处理  25-26
    3.7 样品采集和试验指标测定  26-30
  4 数据处理  30
  5 结果与分析  30-50
    5.1 感染后鲤发病情况  30
    5.2 生长性能指标  30-33
    5.3 肌肉基本成分指标  33-35
    5.4 消化器官发育  35-39
    5.5 肠道组织结构  39-40
    5.6 消化酶活力  40-42
    5.7 免疫功能指标  42-46
    5.8 芽孢杆菌对荧光假单胞菌感染鲤肠道菌群的影响  46-49
    5.9 回归分析表  49-50
  6 讨论  50-63
    6.1 荧光假单胞菌感染情况  50
    6.2 枯草芽孢杆菌对荧光假单胞菌感染鲤存活率的影响  50-51
    6.3 芽孢杆菌对感染鲤生长性能的影响  51-52
    6.4 芽孢杆菌对感染鲤肉质的影响  52-53
    6.5 枯草芽孢杆菌对感染鲤消化吸收功能的影响  53-56
    6.6 芽孢杆菌对感染鲤免疫功能影响  56-60
    6.7 芽孢杆菌对感染鲤肠道微生物组成的影响  60-61
    6.8 芽孢杆菌最适添加量  61-63
  7 结论  63-64
参考文献  64-73
致谢  73

枯草芽孢杆菌JS01对荧光假单胞菌感染鲤免疫和生长性能的影响

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