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CD40信号通过TNFRI途径抑制肺癌细胞增殖的实验研究

作　者: 卢旭东
导　师: 黄建安
学　校: 苏州大学
专　业: 呼吸内科学
关键词: CD40 肺肿瘤肺癌细胞株流式细胞术肿瘤坏死因子受体免疫印迹法
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

目的:CD40活化信号可抑制多种肿瘤细胞体外生长,但其分子机制尚不明确,本研究旨在探讨激发CD40信号对人肺癌细胞株的增殖及肿瘤坏死因子受体(TNFR)、膜型TNF-α(mTNF-α)表达的影响及相关机制。方法:以人肺癌细胞株NCI-H460、A549、SPC-A-1为研究对象,以激发型抗CD40单克隆抗体(5C11)激发肺癌细胞的CD40信号,采用免疫荧光标记和流式细胞术检测肺癌细胞表面CD40的表达以及激发CD40对细胞表面TNFR和mTNF-α表达谱的影响;Western blot检测激发CD40对细胞TNFR和mTNF-α蛋白含量表达的影响;采用四氮唑盐(MTT)比色法抗体中和实验分析阻断TNF信号对CD40激发效应的影响;酶联免疫吸附(ELISA)法检测激发CD40对肺癌细胞培养上清中可溶性TNF-α(sTNF-α)含量的影响。结果:(1)肺癌细胞株NCI-H460、A549、SPC-A-1表面CD40表达率分别为(89±3.2)%、(62.2±4.5)%、(2.3±0.4)%。(2)免疫荧光和流式细胞术示,激发CD40可使NCI-H460和A549细胞表面TNFRI表达率上调(P<0.05),TNFRII和mTNF-α表达率下调(P<0.05)。(3)Western blot示,激发CD40可使NCI-H460和A549细胞TNFRI蛋白表达增强,TNFRII蛋白表达减弱,而mTNF-α蛋白表达无明显变化。(4)激发CD40对SPC-A-1的TNFR、mTNF-α表达无影响(P>0.05)。(5)CD40激发前后肺癌细胞培养上清中未检测到sTNF-α的存在。(6)激发CD40能明显抑制NCI-H460、A549细胞的增殖(P<0.05),而对SPC-A-1的增殖无影响。(7)阻断TNFRI及TNF-α后激发CD40引起的细胞增殖抑制效应消失。结论:激发CD40可抑制CD40表达阳性肺癌细胞A549和H460体外增殖,并引起其TNFR、mTNF-α表达变化,而阻断TNF信号后使激发CD40引起的细胞增殖抑制效应消失,表明mTNF-α/TNFRI途径参与了CD40信号抑制CD40表达阳性肺癌细胞株的体外增殖。

全文目录

中文摘要  3-4
Abstract  4-7
引言  7-10
第一部分激发CD40 对人肺癌细胞株TNFR 及mTNF-α表达的影响  10-24
  1 材料和方法  10-12
  2 结果  12-18
  3 讨论  18-21
  参考文献  21-24
第二部分阻断TNF 信号对CD40 激发效应的影响  24-32
  1 材料和方法  24-25
  2 结果  25-28
  3 讨论  28-30
  参考文献  30-32
结论  32-33
综述：CD40 信号与肿瘤免疫研究进展  33-44
攻读学位期间公开发表或待发表的论文  44-45
缩写词表  45-46
本研究所获的基金资助  46-47
致谢  47-48
详细摘要  48-49

CD40信号通过TNFRI途径抑制肺癌细胞增殖的实验研究

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