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PP2A-A的分子克隆及PP2A-A和PP2A-B在眼睛中的分化表达模式研究

作　者: 李勇
导　师: 李万程
学　校: 湖南师范大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 基因克隆 PP2A-Aα、β PP2A-Bα、β、γ 表达金鱼小白鼠视网膜晶体角膜
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

蛋白质磷酸化和去磷酸化是真核生物体内基本的调控机制。蛋白磷酸酶行使的去磷酸化作用在调控细胞内各种生命过程中起了重要的作用。PP2A是主要的丝/苏氨酸蛋白磷酸酶之一。本实验室之前已经研究了PP2A催化亚基在金鱼和小白鼠眼睛中表达模式,在这里我们克隆出了PP2A-Aα和PP2A-Aβ在金鱼中的cDNA全长并研究了PP2A的结构亚基A和调节亚基B族成员在金鱼和小白鼠眼睛视网膜、晶体上皮、晶体纤维和角膜中的表达模式,其结果如下:(1)本研究首先应用常规的RACE技术克隆出了金鱼中PP2A-Aα和PP2A-Ap的cDNA全长,通过与已知的其他物种的序列比对发现PP2A-Aα和PP2A-Aβ与其他物种推测的氨基酸序列比对同源性分别超过87.7%和83.6%。我们推测的氨基酸序列分析和已经报道的结果一样,PP2A-Aα和PP2A-Aβ蛋白中都有15个由38-43个氨基酸组成的重复序列,这说明PP2A-Aα和PP2A-Aβ在进化上有很高的保守性,同时也说明其在功能上重要性。这为后面继续研究其在金鱼眼睛中的表达提供了基础。(2)在金鱼眼睛中,从蛋白水平来看PP2A的结构亚基A和调节亚基B在视网膜和角膜中表达最高,晶体中表达很低;但从mRNA水平进行比较五个不同的异构体在四种不同组织中表达各有不同;对于受精48hr的金鱼胚胎定位研究,发现在金鱼胚胎眼睛中也是在视网膜与角膜中表达最高,晶体中有所降低。(3)在小白鼠眼睛的四种组织中mRNA水平来看,五个异构体均在视网膜中表达较高,角膜中有三个亚基表达较高,晶体中则只有两个亚基有表达;从蛋白水平来看,PP2A-Aα、β和PP2A-Bα、β、γ都是在视网膜和角膜中表达较高,在晶体中相对低些,组织水平也显示了同样的结果。综上所述,PP2A-Aα、β和PP2A-Bα、β、γ在小白鼠和金鱼眼睛的四种主要组织中表达模式各有不同,PP2A-Aα、β和PP2A-Bα、β、γ的组织特异性表达和细胞内定位很好地显示了PP2A在调节眼睛发育过程中的重要作用。

全文目录

摘要  3-5
ABSTRACT  5-9
前言  9-22
  1 蛋白磷酸酶的分类  10-12
  2 蛋白磷酸酶-2A(PP2A)  12-22
    2.1 PP2A的结构  12-15
    2.2 国内外对PP2A功能研究的进展  15-22
第一章金鱼中PP2A-Aα与PP2A-Aβ的cDNA克隆  22-40
  1 材料和方法  22-30
    1.1 实验材料  22
    1.2 实验方法  22-30
  2 实验结果  30-38
  3 讨论  38-40
第二章 PP2A-Aα、β与PP2A-Bα、β、γ在金鱼和小白鼠眼睛中的分化表达模式  40-68
  1 材料与方法  41-51
    1.1 材料  41
    1.2 方法  41-51
  2 实验结果  51-62
    2.1 PP2A-Aα、β与PP2A-Bα、β、γ在金鱼和小白鼠眼睛中的RT-PCR结果  51-55
    2.2 PP2A-Aα、β与PP2A-Bα、β、γ在金鱼和小白鼠眼睛中Western blot结果  55-62
  3 讨论  62-68
结论  68-70
参考文献  70-77
附录一:缩略词表  77-78
附录二:主要实验试剂和仪器  78-79
附录三:硕士学习期间撰写、发表的主要论文及获奖情况  79-80
致谢  80-82

PP2A-A的分子克隆及PP2A-A和PP2A-B在眼睛中的分化表达模式研究

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