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草鱼、白鲢几种细菌性疾病病原的分离及其特性研究

作　者: 唐毅
导　师: 万永继
学　校: 西南大学
专　业: 特种经济动物饲养
关键词: 草鱼 白鲢 细菌性疾病 肺炎克雷伯氏菌 免疫效应
分类号: S941
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要


草鱼、白鲢作为我国传统的优良淡水养殖品种,一直深受广大渔农欢迎。尤其是近年来,市场多样化的需求使得草鱼、白鲢的需求量逐年递增,价格稳中有升,加上青饲料养殖草鱼成本低,效益高,白鲢摄食水体中的天然饵料生物,符合人们对天然食品的需求。因此,草鱼、白鲢如今更是被广泛推广养殖。但由于随着水产集约化养殖的发展,各种养殖方式的放养密度越来越大,人工配合饲料投喂量大大增加,养殖水体的水质也日益恶化。加上人们对防病治病的意识落后,水产病害研究滞后,因而多种细菌性疾病如细菌性烂鳃病、赤皮病和肠炎病等,白鲢细菌性败血症、烂鳃病等传染性疾病的危害更加严重,已成为严重影响其健康养殖和制约其产量与经济效益提高的主要因素,被称为阻碍草鱼、白鲢养殖规模化发展的瓶颈。本论文针对草鱼、白鲢所患几种严重的细菌性疾病,进行了致病菌的分离、鉴定及其有关特性的测定,并进行了常用抗生素和中草药对草鱼细菌性烂鳃、肠炎、赤皮病病原菌和白鲢肺炎克雷伯氏菌的药物敏感性试验,研究比较了采用福尔马林灭活荧光假单胞菌所制成的浸泡疫苗、注射疫苗和口服微囊疫苗对健康草鱼种的免疫效果。1草鱼细菌性烂鳃、肠炎、赤皮病致病菌的分离及其特性鉴定分别从患烂鳃病、肠炎病和赤皮病的草鱼体上分离出2株（CLS-01、CLS-02）、1株（CCY-01）和2株（CCP-01、CCP-02）纯化细菌。经形态学、染色特性、溶血性和理化特性鉴定,分别为柱状屈扰杆菌（Flexibacter columnaris）、肠型点状气单胞菌（Aeromonaspunctata f.intestinalis）和荧光假单胞菌（Pseudo-monasfluorescens）。致病性试验结果表明,3种分离菌使试验草鱼分别于96h、48h和96h内的死亡率达到100%、95%和100%,并从病死草鱼体中回收到与自然病例相同的分离菌。中西药药敏试验表明,3种分离菌除对氨苄西林钠、苦参、马鞭草、柴胡、穿心莲、大青叶、中草药复方3、复方6完全不敏感（CCP-01对黄柏、黄连、地锦草和筋骨草,CLS-01对筋骨草、鱼腥草亦不敏感）以外,对其它试验用抗生素和中草药及其复方均呈现不同程度的敏感性。其中CLS-01对氧氟沙星（50mg/L）、CCY-01对恩诺沙星（50 mg/L）利诺氟沙星（50mg/L）以及3种分离菌对五倍子、中草药复方1、复方2、复方5、复方9均极度敏感。恩诺沙星、氟苯尼考、五倍子和黄芩对3种菌（CLS-01、CCY-01、CCP-01）的最小抑菌浓度分别为（0.391mg/L、0.049mg/L、0.781mg/L）,（0.977mg/L、0.4883mg/L、31.250mg/L）,（0.781mg/mL、1.563mg/mL、0.391mg/mL）,（1.563mg/mL、6.250mg/mL、25.000mg/mL）:最小杀菌浓度分别为（1.562mg/L、0.195mg/L、3.125mg/L）,（3.906mg/L、3.9062mg/L、125.000mg/L）,（3.125mg/mL、6.25 mg/mL、1.563mg/mL）,（15.625mg/mL、25.000mg/mL、100.000mg/mL）。结果显示,恩诺沙星、氟苯尼考、五倍子和黄芩对以上三种水产致病菌均表现出较强的抑菌和杀菌作用。在安全浓度范围内合理用药,安全有效。2白鲢烂鳃病致病菌的分离鉴定及其特性测定本研究从患病白鲢鳃、肝胰脏分离到致病细菌,该菌为革兰氏阴性菌,具荚膜,粗短杆状,大小约0.3-0.4×0.5-0.81μm,单个存在或两个相连:发酵葡萄糖产酸产气,乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、枸橼酸盐、尿素显阳性;对鸟氨酸、蛋白胨水、卫茅醇、苯丙氨酸、H2S均为阴性;V-P试验强阳性,细菌学鉴定该菌为肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）。分离菌经胸鳍基注射回归感染试验均出现与自然发病相似的症状。采用纸片扩散法和二倍稀释法分别测定了常用抗菌西药对该菌的敏感度与最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）,同时采用打孔法测定了常用中草药对该菌的敏感度。结果表明:所选17种抗菌西药对分离菌（KPCQC01）均有不同程度的抑制作用,其中氧氟沙星（50mg/L）、盐酸环丙沙星（50mg/l）、诺氟沙星（50mg/l）、SMZ:TMZ（100mg/l）、氟苯尼考（50mg/l）、对该菌极度敏感,但诺氟沙星、盐酸环丙沙星和氟苯尼考的抗菌活性不如氧氟沙星和复方SMZ:TMZ强;甲氧苄定TMZ（100mg/l）、氨苄西林钠（0.2mg/l）高度敏感:复方新诺明（100mg/l）、硫酸庆大霉素（0.04万IU/ml）、甲砜霉素（50mg/l）、氯霉素（50mg/L）中度敏感;两种氯制剂、磺胺甲恶唑（100mg/l）、麦迪霉素（50mg/l）、土霉素（50mg/l）、罗红霉素（50mg/l）抑菌效果不明显;氧氟沙星和复方SMZ:TMZ2种药物,在48h内对该菌抑菌的持续性较好,且最小抑菌浓度和最小杀菌浓度分别为0.5mg/L和1.0mg/L与6.25mg/L和400mg/L。所选12种常用单方中草药中。五倍子对分离菌（KPCQC01）极度敏感;金银花、鱼腥草、黄芩和地渝高度敏感;细菌对黄连、地锦草、龙胆草等不敏感;11组中草药复方对该菌都具有较为明显的抑菌效果,其中以复方9的抑菌效果最佳,其抑菌圈直径达29.7mm。3草鱼赤皮病的免疫效应研究采用0.5%福尔马林灭活草鱼赤皮病病原菌分别制成浸泡疫苗、注射疫苗和口服微囊疫苗,然后以相应的疫苗分别浸泡（含菌数为1.5×107cfu/ml的菌苗溶液）3～5cm当年夏花草鱼、0.2ml/尾注射（含菌数为1.5×108cfu/ml的菌苗）10g左右的草鱼、16g/组·次微囊疫苗混合饲料（含2%微囊疫苗）投喂10g左右的草鱼。接种免疫后,分别于第21d、35d、49d、63d及77d,通过检测实验对象的血清和采用活菌攻毒的方法,探讨了灭活菌苗对预防草鱼赤皮病的效果。结果显示,所制疫苗3种免疫途径都有免疫效果。全菌灭活疫苗浸泡免疫、注射免疫和微囊化疫苗口服免疫的抗体滴度（凝集抗体效价）平均分别为1:19、1:190、1:62;用荧光假单胞菌活菌攻毒显示,3种免疫途径均产生良好的保护效应,其免疫保护率分别达41.6%和40.0%、83.4%和80%、58.4%和53.3%。

全文目录


摘要  6-8
Abstract  8-11
第1章 文献综述  11-29
  1 我国水产动物疾病的研究概况  11-18
    1.1 水产动物病毒病的研究  11-12
    1.2 水产动物细菌病的研究  12-18
    1.3 水产动物寄生虫病的研究  18
  2 草鱼、白鲢细菌性疾病的研究  18-23
    2.1 草鱼的细菌性疾病  18-22
    2.2 白鲢的细菌性疾病  22-23
  3　细菌鉴定方法  23-25
    3.1 形态学检查  23-24
    3.2 生化试验  24
    3.3 细菌血清型鉴定及血清学试验  24-25
  4 药敏试验在水产动物疾病研究及防治中的应用  25
  5 中西药防治水产动物疾病的研究  25-26
    5.1 关于中草药预防与治疗  25-26
    5.2 抗生素及其它有关化学药物的预防与治疗  26
  6 免疫学研究进展  26-29
    6.1 疫苗对鱼类的免疫保护机理  26-27
    6.2 水产疫苗研究进展  27-29
第2章 引言  29-31
  1 研究的目的和意义  29
  2 主要研究内容  29-31
    2.1 草鱼细菌性烂鳃、肠炎和赤皮病病原菌的分离与鉴定  29-30
    2.2 草鱼细菌性烂鳃、肠炎和赤皮病病原菌药物敏感性试验  30
    2.3 白鲢肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定及药敏试验  30
    2.4 荧光假单胞菌灭活疫苗对草鱼的免疫保护效应究  30-31
第3章 草鱼细菌性烂鳃、肠炎、赤皮病致病菌的分离及其特性  31-53
  1 材料与方法  31-38
    1.1 材料  31-33
    1.2 方法  33-38
  2 结果与分析  38-50
    2.1 细菌的分离  38-39
    2.2 分离菌的特性鉴定  39-44
    2.3 草鱼细菌病人工感染试验  44-45
    2.4 药物敏感性  45-50
  3 讨论  50-53
第4章 白鲢烂鳃病致病菌的分离及其特性  53-63
  1 材料与方法  53-56
    1.1 材料  53-54
    1.2 方法  54-56
  2 试验结果与分析  56-62
    2.1 病原菌的鉴定  56-58
    2.2 人工感染试验  58
    2.3 药物敏感性  58-62
  3 讨论与结论  62-63
第5章 草鱼赤皮病的免疫效应研究  63-70
  1 材料与方法  63-65
    1.1 材料  63
    1.2 方法  63-64
    1.3 免疫方法  64-65
    1.4 采血及凝集抗体效价的测定  65
    1.5 免疫保护力的测定  65
  2 结果  65-68
    2.1 全细胞疫苗的安全性  65-66
    2.2 口服菌体微囊疫苗的制备与检测结果  66
    2.3 凝集抗体效价  66-67
    2.4 攻毒感染结果及3种免疫途径的效果比较  67-68
  3 讨论  68-70
    3.1 制备口服微囊疫苗的影响因素  68
    3.2 3种免疫途径的效果比较  68-70
参考文献  70-77
致谢  77-78
硕士学习期间发表的论文及参与的课题  78

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中图分类: > 农业科学 > 水产、渔业 > 水产保护学 > 鱼病学
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