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雄激素受体基因及钙蛋白酶10基因多态性与老年男性代谢综合征的相关性研究

作　者: 杨立娜
导　师: 叶玲
学　校: 中国人民解放军军医进修学院
专　业: 老年医学
关键词: 代谢综合征老年男性雄激素受体钙蛋白酶10 多态性
分类号: R589
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

研究背景代谢综合征（Metabolic Syndrome,MS）是一组复杂的代谢紊乱症候群,其组分包括血糖异常、脂代谢紊乱、高血压、肥胖等代谢异常。随着社会经济的发展,代谢综合征的发生率随年龄增长而增加。估计全球大约有四分之一的成年人患有代谢综合征,其死于心脏病或中风的风险是无代谢综合征人群的2倍,而且代谢综合征人群发生2型糖尿病的风险升高5倍。随着对代谢综合征研究的深入,近年来有关雄激素在男性代谢综合征发病中的作用日益受到关注。有研究显示,老年男性代谢综合征患者存在低水平的脱氢表雄酮（DHEAS）、总睾酮（TT）、性激素结合球蛋白（SHBG）、游离睾酮（FT）和雄激素受体（androgen receptor,AR）。多数流行病学资料显示低水平的睾酮是男性代谢综合征和糖尿病的危险因素。已有文献报道较低的总睾酮、游离睾酮和性激素结合球蛋白（SHBG）浓度与代谢综合征强烈相关。雄激素通过雄激素受体发挥生理作用。雄激素受体基因第一外显区存在CAG重复多态性,目前研究认为AR的表达与功能可能受AR基因CAG重复序列微调控。本研究旨在通过AR基因多态性-AR表达水平-代谢综合征三个环节来观察AR基因多态性对AR表达的调控作用及其与老年男性代谢综合征的关系,为代谢综合征的防治提供一定的理论依据。钙蛋白酶10（Calpain 10,CAPN 10）基因是第一个被定位克隆的糖尿病易感基因。有研究表明CAPN 10-SNP43G/G基因型个体较G/A,A/A个体更易患糖尿病,且G/G纯合子较G/A,A/A有更高的收缩压和甘油三酯水平。有学者报道CAPN 10-SNP43G/G与中心性肥胖或胰岛素抵抗相关。由此推断在发病机制上,CAPN 10基因多态性和代谢综合征密切相关,CAPN 10基因可能也是代谢综合征的易感基因。研究目的（1）构建AR基因CAG重复数为0、21、33的表达载体（包括完整的AR编码序列和5’-UTR及部分3’-UTR,已证实5’-UTR和3’-UTR为转录调控区）,转染人胚肾HEK293细胞,观察CAG重复序列多态性对AR的转录活性、表达水平的影响。（2）探讨AR基因第一外显子区CAG重复多态性与老年男性代谢综合征的关系。（3）观察CAPN 10-SNP43G/A等位基因多态性的分布情况,并探讨其与老年男性代谢综合征的关系。研究对象从北京万寿路地区流行病学调查资料数据库中筛选老年男性（≥60岁）312例。代谢综合征患者119例,年龄60-83,平均68.97±5.39。非代谢综合征193例,其中一种代谢紊乱组89例,年龄60-82,平均年龄68.06±4.82;两种代谢紊乱组合组51例,年龄60-81,平均年龄68.29±5.35;无代谢紊乱组53例,年龄60-85,平均68.43±5.21。以上入选者均为久居北京的汉族人。代谢综合征患者按2005年国际糖尿病联盟IDF关于代谢综合征的诊断标准进行筛选。研究方法实验方法一AR基因CAG重复数为0、21、33的表达载体的构建以AR基因CAG重复数为0、21、33基因组DNA为模板,通过重组PCR反应对目的基因进行扩增和拼接,并将其克隆至pwtAR-IRES2-EGFP表达载体。实验方法二AR基因在真核细胞HEK293细胞中的表达将CAG重复数为0、21、33的重组质粒转染人胚肾HEK293细胞,用RT-PCR和Western blot检测AR基因的表达情况。实验方法三CAPN 10基因多态性的检测用酚/氯仿抽提核酸法提取研究对象外周血白细胞的基因组DNA,以DNA为模板,用扩增阻滞突变系统聚合酶链反应扩增170bp的目的片段,通过PCR产物凝胶电泳图谱进行CAPN 10-SNP43G/A基因型判定。研究结果（1）成功构建AR基因CAG重复数为0、21、33的表达载体,酶切及测序鉴定正确。（2）CAG重复数目与AR mRNA和AR蛋白表达水平之间的关系:在ARmRNA水平,CAG₀最高,CAG₃₃次之,CAG₂₁最低。三者比较差别不显著;在AR蛋白水平,三者比较有统计学意义,CAG₀表达最高,而CAG₂₁同CAG₃₃的表达量比较差别不大。（3）四组研究对象的临床特点:随着代谢紊乱成分的增加,体重、BMI、腰围、臀围、收缩压、舒张压、甘油三酯、空腹血糖指标增加,高密度脂蛋白指标降低,MS组与其他组比较,差异更为显著。（4）代谢综合征组AR基因CAG重复范围为10-33,平均22.82±3.58,中位数为23;一种代谢紊乱组AR基因CAG重复范围为11-30,平均22.25±3.24,中位数为22;两种代谢紊乱组AR基因CAG重复范围为12-32,平均22.41±3.54,中位数为22;无代谢紊乱组AR基因CAG重复范围为8-34,平均22.72±4.11,中位数为22;四组之间均数比较差异无显著性。（5）按AR基因所含CAG重复数,将其分为短CAG组（数量＜22）与长CAG组（数量＞22）。四组研究对象之间CAG的构成比差异无显著性。长CAG组的体重、BMI、腰围和臀围均高于短CAG组。（6）卡方检验表明,CAPN 10-SNP43G/A多态性的基因型频率在四组间差异无显著性（P＞0.05）,基因型以GG纯合子最多见。四组均以等位基因G为主,等位基因频率的分布在四组间差异亦无显著性（P＞0.05）。（7）多元逐步回归后,BMI、臀围、体重、年龄、胆固醇、空腹血糖和高密度脂蛋白与中心性肥胖有关。logistic多元回归分析:甘油三酯、空腹血糖、腰围、收缩压是代谢综合征的独立危险因素;CAG重复数、CAPN 10-SNP43G/A基因型等因素与代谢综合征无关。结论（1）在AR基因（CAG）n正常范围内,CAG重复数目与AR mRNA和AR蛋白表达水平之间不存在线性负相关,但CAG缺失即CAG₀表达水平最高。（2）长CAG组（数量≥22）的人群有较高的体重、BMI、腰围和臀围。BMI、臀围、体重、年龄、胆固醇、空腹血糖、高密度脂蛋白与腰围相关。（3）CAPN 10-SNP43G/A多态性的基因型频率和等位基因频率的分布在四组间差异无显著性（P＞0.05）。基因型以GG纯合子最多见,等位基因以G为主。（4）在本研究中,甘油三酯、空腹血糖、腰围、收缩压是老年男性代谢综合征的独立危险因素;CAG重复数、CAPN 10-SNP43G/A基因型等因素与老年男性代谢综合征无关。

全文目录

英文缩写词表  5-7
中文摘要  7-11
英文摘要  11-15
第一部分雄激素受体基因表达载体的构建  15-29
  实验材料  15-18
  实验方法  18-24
  实验结果  24-26
  讨论  26-29
第二部分雄激素受体基因在真核细胞HEK293细胞中的表达  29-43
  实验材料  29-30
  实验方法  30-34
  实验结果  34-38
  讨论  38-43
第三部分雄激素受体基因CAG重复多态性及钙蛋白酶10基因SNP-43多态性与代谢综合征的临床分析  43-59
  实验材料  46-48
  实验方法  48-50
  实验结果  50-56
  讨论  56-59
研究不足  59-60
参考文献  60-68
综述  68-75
  参考文献  72-75
致谢  75

雄激素受体基因及钙蛋白酶10基因多态性与老年男性代谢综合征的相关性研究

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