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近年来,微生物污染所造成的食源性疾病和潜在的健康危害已成为世界各国主要的公共卫生问题。目前,我国食品中致病菌的检测手段主要采用传统的国标方法,其检测时间长、灵敏性不高,不利于食源性疾病的预防和控制,对我国消费者的健康造成严重威胁。WHO将单核细胞增生性李斯特杆菌(Listeria monocytogenes,LM)列为20世纪90年代四大食品致病菌(即致病性大肠杆菌,肉毒梭菌,亲水气单胞菌和LM)之一,同时被列为21世纪对中国人卫生健康具有重大影响的12种病原微生物之一,由其引起的疾病致死率高达30~40%。为了改进该菌的检测方法,我们研制了抗单核细胞增生性李斯特杆菌的单克隆抗体。本研究采用灭活后的单核细胞增生性李斯特杆菌全菌免疫雌性BALB/c小鼠,待小鼠尾静脉全血效价达到1:10000以上,取其脾脏与SP2/0骨髓瘤细胞按常规方法进行细胞融合,脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞的比例为8:1,经间接ELISA方法进行筛选,对强阳性单克隆孔进行克隆,经过5次有限稀释法克隆后,共获得4株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1B9、2C3、4D8和4H6,对其亚类进行鉴定,分别为IgG1、IgG1、IgG2b和IgG1;四代腹水效价相差不大,说明分泌抗体能力比较稳定;染色体鉴定,分别为104、106、103和107条染色体,符合杂交瘤细胞的特性;配对实验显示1B9和2C3,4D8和1B9,4D8和2C3,4H6和1B9,4H6和2C3单克隆抗体分别针对不同的抗原表位,4H6和4D8单克隆抗体针对相同的抗原表位;交叉反应显示,只有4D8与大肠杆菌有轻微的交叉反应。
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