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中性人参多糖的系统分级及结构分析

作　者: 刘海波
导　师: 周义发
学　校: 东北师范大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 人参淀粉样多糖多糖分级结构分析
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

人参(Panax ginseng C.A.Meyer.)是宝贵中药,含有大量的活性成分,包括人参皂苷、人参多肽和人参多糖等等。人参多糖具有良好的免疫调节、抗肿瘤、抗氧化和降血糖等多种生物活性。但1966年Solov ’eva和Ovodov第一次报道人参多糖以来,人参多糖的结构研究主要集中在人参酸性糖——果胶部分,而对中性人参多糖——淀粉样多糖的分级和结构研究较少,影响了中性多糖的开发与应用。针对以上问题,本论文研究了中性人参多糖的分离纯化和结构分析,系统比较了不同浓度醇沉对中性人参多糖分级的影响,并对50%乙醇沉淀得到的人参多糖级分进行了精细结构分析。将人参根中提出粗多糖经Sevage法脱蛋白、醇沉、常规干燥得到人参根总糖WGP,再经DEAE-Cellulose离子交换柱层析分离得到酸性多糖级分WGPA和中性多糖级分WGPN。苯酚-硫酸法检测WGPN总糖含量为96.7%。HPLC法检测WGPN含有95.3%的葡萄糖,痕量的半乳糖和阿拉伯糖。通过酶解、IR(红外光谱)分析和NMR(核磁共振波谱)对WGPN进行结构鉴定,结果显示WGPN为以α-1,4-Glcp为主链,并存在α-1,4,6-Glcp的分支的吡喃型葡聚糖。用不同浓度乙醇将WGPN进一步分级,并检测不同浓度醇沉沉淀的淀粉含量、单糖组成和分子量。结果表明,分级所得沉淀的淀粉含量和分子量随分级乙醇浓度的升高而逐渐下降,当醇浓度达到60%时,基本能将人参水提物中的多糖和寡糖分离,大分子量多糖由葡萄糖构成,小分子量多糖和寡糖由葡萄糖、阿拉伯糖和半乳糖构成。各个级分经高碘酸氧化、Smith降解和NMR分析,推断出WGPN应是多种淀粉类似机构组成的多糖混合物。WGPN的50%乙醇分级沉淀部分WGPN-50%-EP的经部分酸水解后制备糖样WGPN-50%-AH, NMR分析,推断出WGPN-50%-AH有5种同分异构体,是中性人参多糖的的重要组成单元。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-7
目录  7-10
第一章引言  10-18
  1 多糖结构的概述  10-11
  2 多糖活性的概述  11-13
    2.1 抗辐射作用  11-12
    2.2 抗肿瘤作用  12
    2.3 降血糖、降血脂作用  12
    2.4 增强免疫作用  12
    2.5 抗衰老作用  12-13
    2.6 其他功能  13
  3 多糖活性与结构的关系概述  13-15
    3.1 多糖的活性与物理性质的关系  13
    3.2 多糖的活性与一级结构的关系  13-15
    3.3 多糖的活性与空间结构的关系  15
  4. 中性人参多糖的研究进展  15-17
    4.1 中性人参多糖结构的研究进展  16-17
    4.2 中性人参多糖活性的研究进展  17
  5 本论文选题依据  17-18
第二章实验方法  18-31
  1 材料与实验仪器  18-19
    1.1 实验材料  18
    1.2 实验试剂  18
    1.3 实验仪器与设备  18-19
  2 中性人参多糖的提取、分离与纯化  19-21
    2.1 人参粗多糖的提取  19
    2.2 人参根总糖的常规干燥  19
    2.3 Sevage法脱蛋白  19
    2.4 离子交换层析分离中性人参多糖  19-21
  3. 中性多糖的理化性质测定  21-23
    3.1 苯酚-硫酸法测定总糖含量  21
    3.2 间羟联苯法测糖醛酸含量  21-22
    3.3 考马斯亮蓝法测定粗多糖样品中的蛋白含量  22-23
  4. 分子筛层析测分子量分布  23-24
    4.1 分子量标准曲线的制作  23
    4.2 多糖样品的分子量测定  23-24
  5. 高效液相色谱法测定单糖组成  24
    5.1 糖样品的预处理  24
    5.2 高效液相色谱分析条件  24
  6. 酶解分析  24-25
  7. 红外光谱检测  25
  8. 核磁共振波谱检测  25-26
  9. 中性人参多糖的分级及结构的研究  26-29
    9.1 醇沉分级  26
    9.2 中性人参多糖各级分的淀粉含量的测定  26-27
    9.3 中性人参多糖各级分单糖组成的测定  27
    9.4. 高效液相色谱法检测各级分糖样品分子量  27-28
    9.5 高碘酸氧化  28-29
    9.6 Smith降解  29
    9.7 中性人参多糖各级分的NMR分析  29
  10. 多糖部分酸水解  29-31
    10.1 部分酸水解时间的选择  30
    10.2 部分酸水解样品制备与分析  30-31
第三章结果与讨论  31-50
  1 中性人参多糖分离制备及理化性质分析  31-36
    1.1 中性人参多糖分离制备  31
    1.2 中性人参多糖初步结构分析  31-36
  2 中性人参多糖醇沉分级及结构分析  36-46
    2.1 中性人参多糖醇沉分级及相关样品的淀粉含量  36-37
    2.2 中性人参多糖醇沉分级样品单糖组成  37-39
    2.3 通过高效液相凝胶色谱柱测定分子量分布  39-42
    2.4 中性糖各级分的高碘酸氧化和Smith降解  42-43
    2.5 中性糖各级分的NMR分析  43-46
  3. WGPN-50%-EP的精细结构分析  46-50
    3.1 WGPN-50%-EP的部分酸水解  46-47
    3.2 WGPN-50%-AH的NMR分析  47-50
结论  50-52
参考文献  52-56
附录  56-57
致谢  57

中性人参多糖的系统分级及结构分析

内容摘要

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