血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及细胞周期的影响并探讨其可能的机制。方法:采用组织块贴壁法培养SD大鼠胸主动脉VSMC, MTT比色法观察Rb1 (25μg/ml、50μg/ml、100μg/" />
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人参皂苷Rb1抗血管平滑肌细胞增殖及球囊损伤所致颈动脉内膜增生的研究

作 者: 张纾
导 师: 黄燮南
学 校: 遵义医学院
专 业: 药理学
关键词: Rb1 血小板源性生长因子 血管平滑肌细胞 增殖 细胞周期 人参皂苷Rb1 增生 血管平滑肌 表型转化 球囊损伤 再狭窄
分类号: R285.5
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 25次
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内容摘要


目的:研究人参皂苷Rb1 (ginsenoside Rb1, Rb1)对血小板源性生长因子BB (PDGF-BB)所致血管平滑肌细胞 的学位论文">血管平滑肌细胞(VSMC)增殖细胞周期的影响并探讨其可能的机制。方法:采用组织块贴壁法培养SD大鼠胸主动脉VSMC, MTT比色法观察Rb1 (25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)对PDGF-BB (25ng/ml)所诱导的VSMC增殖的影响,并用流式细胞仪分析细胞增殖周期;一氧化氮(NO)测试盒测定细胞培养上清液中NO含量;Real-time RT-PCR检测(?)VSMC中周期蛋白A (Cyclin A)、周期蛋白E (Cyclin E)、周期蛋白依赖性蛋白激酶2(CDK2)、钙调神经磷酸酶(CaN)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA表达。结果:在正常细胞中加入高浓度Rb1(100μg/ml)不影响VSMC的光密度值,也不改变G0/G1期、G2/M期和S期细胞比例(P>0.05);而加入PDGF-BB则使细胞的光密度值明显升高(P<0.01),并使细胞周期中S期细胞比例明显增加(P<0.01),Go/G1期细胞比例相应降低(P<0.01); PDGF-BB还降低细胞培养上清液中的NO含量,显著增高Cyclin A、Cyclin E、CDK2、CaN、iNOS mRNA的表达(P<0.01),而降低eNOS的表达(P<0.01)。加入Rb1 (25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)可呈浓度依赖性抑制(?)VSMC在MTT测定中由PDGF-BB诱导的光密度值的升高,降低细胞周期中S期细胞,而升高G0/G1期细胞比例(P<0.01),显著下调PDGF-BB所升高的Cyclin A、Cyclin E、CDK2、CaN mRNA表达(P<0.01);此外,100μg/ml Rb1可下调iNOS mRNA而上调eNOS mRNA表达(P<0.01),上清液NO含量不变;中低浓度Rb1使iNOS mRNA表达趋于降低,eNOS mRNA表达趋于增高,但能升高VSMCs上清液中NO含量。结论:Rb1能抑制(?)JPDGF-BB诱导的VSMC增殖,该作用可能是通过下调Cyclin A、Cyclin E、CDK2 mRNA表达而阻碍G0/G1期向S期过渡所致。Rb1下调CaN mRNA表达可能是其抗增殖作用的分子机制之一,中、低浓度Rb1的抗增殖作用还可能与其促进NO释放有关。目的:研究人参皂苷Rb1(Ginsenoside Rb1, Rb1)对球囊损伤所致大鼠颈总动脉内膜增生的影响并探讨其可能的作用机制。方法:建立大鼠颈总动脉内膜球囊损伤所致增生模型;实验动物分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、Rb1低(10mg/kg/d, Rb1-L)、高(30mg/kg/d, Rb1-H)剂量组,制模后次日腹腔注射给药,连续给药14天(Model组与Sham组给予等体积生理盐水)后取损伤侧颈总动脉行H.E.染色,计算其内膜面积(NIA)及内膜面积/中膜面积(NIA/MA)以评价新生内膜增生程度,并观察增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)阳性表达率来判断内膜增生与细胞增殖的关系;采用羟胺法、比色法和免疫酶联吸附试验(Elisa)分别检测大鼠血浆中超氧化物歧化酶(SOD)的活力,丙二醛(MDA)含量和环磷酸鸟苷(cGMP)的含量;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测颈总动脉血管壁中原癌基因c-myc mRNA,平滑肌α-肌动蛋白(SM a-actin) mRNA,胚胎型肌球蛋白重链(embryonic smooth muscle myosin heavy chain, SM-emb), p38 mRNA的表达;免疫组织化学法检测PCNA、SMα-actin和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase1/2, ERK1/2)蛋白的表达。结果:与Sham组比较,Model组大鼠颈动脉管腔明显狭窄、内膜显著增厚、PCNA阳性表达率明显升高(P<0.01)。Rb1的两个剂量给药均使球囊损伤所致颈动脉管腔狭窄程度显著减轻,颈动脉NIA. NIA/MA明显减小(P<0.01),并使PCNA阳性表达率显著下降(P<0.01);球囊损伤还使大鼠血浆SOD活力及cGMP含量降低,MDA含量增高,而Rb1则明显升高血浆SOD活力和cGMP含量(P<0.01或P<0.05)、降低MDA含量(P<0.01或P<0.05);Rb1还可显著降低球囊损伤所增强的血管壁pERK1/2的蛋白表达及c-myc mRNA的表达(P<0.01或P<0.05),但对p38 mRNA的表达影响不明显(P>0.05)。此外,Rb1还可下调SM-emb mRNA表达(P<0.01),高剂量上调SM a-actin mRNA及蛋白的表达(P<0.05)。结论:(1)Rb1具有明显的抑制球囊损伤所致血管内膜异常增生的作用,可能主要是通过抑制(?)VSMC的移行、增殖而起作用;(2)Rb1抑制脂质过氧化反应,升高cGMP含量可能参与其抗VSMC增殖的作用;(3)Rbl的抗VSMC增殖作用可能与其抑制VSMC表型转化的作用有关;(4)Rb1抑制pERK1/2蛋白质的磷酸化,下调c-myc mRNA表达可能是其抗VSMC增殖的重要环节。

全文目录


缩略词  6-8
前言  8-10
第一部分 人参皂苷Rb_1对PDGF-BB所致血管平滑肌细胞 的学位论文">血管平滑肌细胞增殖周期的影响  10-30
  中文摘要  10-11
  英文摘要  11-13
  材料与方法  13-20
  结果  20-27
  讨论  27-29
  结论  29-30
第二部分 人参皂苷Rb_1对大鼠颈总动脉球囊损伤后内膜增生的影响  30-57
  中文摘要  30-32
  英文摘要  32-34
  材料与方法  34-42
  结果  42-54
  讨论  54-57
  结论  57
参考文献  57-65
附:川芎嗪对球囊损伤后大鼠血管新生内膜的影响  65-77
综述  77-86
  参考文献  82-86
致谢  86-87
个人简介  87

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