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卵叶娃儿藤生物碱的提取及其活性功能研究

作　者: 胡志国
导　师: 王远兴
学　校: 南昌大学
专　业: 营养与食品卫生学
关键词: 卵叶娃儿藤 生物碱 含量测定 微波辅助提取 超临界CO2提取 分离纯化 抑菌 抗肿瘤
分类号: R284.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要


卵叶娃儿藤是我国传统的有毒药用植物,在我国医学中很早就已经临床使用,现代医学研究发现,卵叶娃儿藤中的生物碱成分具有抗肿瘤作用,因此对其生物碱类化合物的研究具有重要的科学价值,为卵叶娃儿藤的药理活性,药效试验研究及天然保健和治疗药物的开发提供理论与物质基础。现将主要研究结果概述如下;1.应用现代食品分析技术,对卵叶娃儿藤的基本理化成分进行了分析,结果为（g/100g,干重）;水分含量为9.44;灰分含量为6.30;总糖含量为2.67;粗纤维含量为17.03;蛋白质含量为14.20;脂肪含量为11.32。对卵叶娃儿藤SFE-CO2萃取物采用气-质连用（GC-MS）技术进行成分分析,主要成分为Hexadecanoicacid,ethyl ester（十六酸乙酯）、n-Hexadecanoic acid（十六酸）、Hexadecanoicacidmethyl ester（十六酸甲酯）、2-Nitro-4-（trifluoromethyl）phenol（2-硝基-4-（三氯甲基）-苯酚）、8-Methoxy-2-methylquinoline（8-甲氧基-2-甲基喹啉）、1-（12-methyl-1-oxotetradecyl）-1-Pyrrolidine（12-甲基-1-十四烷酰基）-吡咯烷、1-Phenyl-1-azaspiro[4,5]decane（1-苯基-1-氮杂螺[4,5]庚烷）等。2.将溴酚蓝酸性染料比色法用于卵叶娃儿藤总生物碱的测定。通过对比色条件进行优化得到最佳条件;加入pH值为4.2的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲溶液4.0mL,溴酚蓝染料1.5mL,用12mL氯仿萃取。结果表明,该测定方法精密度高,在60min内显色稳定,操作简单,是一种快速测定卵叶娃儿藤总生物碱的有效方法。3.对溶剂法、微波辅助萃取法和超临界流体萃取法提取卵叶娃儿藤总生物碱的工艺分别进行了研究。确立了溶剂法最佳工艺条件为;乙醇浓度90%、固液比1;25、提取温度90℃、提取2次、每次2h。卵叶娃儿藤总生物碱的提取率可达0.386%。各提取因素对总生物碱提取率的影响程度由大到小依次为;温度＞乙醇浓度＞固液比＞提取次数。首次将超临界CO2萃取技术用于卵叶娃儿藤生物碱的提取研究。通过考察夹带剂（乙醇）浓度、萃取温度、压力和萃取时间等影响因素,得出总生物碱的最佳提取工艺参数分别为;80%乙醇作为夹带剂、在温度50℃、压力25MPa的条件下提取90分钟。超临界提取各因素对总生物碱提取率的影响大小顺序依次为;提取温度＞提取时间＞夹带剂浓度＞提取压力。卵叶娃儿藤总生物碱的提取率为0.249%,低于溶剂法提取,但杂质含量低。确立了微波辅助提取法最佳工艺条件为;乙醇浓度90%、固液比1;20、提取温度90℃、提取2次、每次15分钟。卵叶娃儿藤总生物碱的提取率可达0.436%。各提取因素对总生物碱提取率的影响程度由大到小依次为;温度＞乙醇浓度＞固液比＞提取时间。微波辅助提取法产率高于溶剂法提取和超临界流体萃取。4.利用现代分析技术,建立了LC-MS分析卵叶娃儿藤中生物碱成分的定性方法。为以后在没有标准对照品的情况下进行分析、研究及定性检测植物样品中的生物碱成分提供了科学依据。5.采用硅胶柱色谱纯化了卵叶娃儿藤总生物碱。得到两个化合物,经过对其UV、IR、ESI-MS、EI-MS、1H-NMR和13C-NMR色谱数据进行分析,鉴定出两种新的化合物,均是首次从卵叶娃儿藤中得到。6.采用MTT法分析化合物1和化合物2抑制肿瘤细胞增殖作用,细胞毒实验表明化合物1和化合物2作用48h可显著抑制体外培养的人宫颈癌Hela细胞的生长,剂量-效应呈正相关,半数抑制浓度(IC50)分别为98μg/mL和218μg/mL。结果表明化合物1和化合物2具有明显抑制Hela肿瘤细胞增殖的作用。采用圆滤纸片法考察卵叶娃儿藤总生物碱的抑菌作用,通过卵叶娃儿藤总生物碱对大肠埃希氏杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、产气杆菌（Aerobacter aerogenus）、普通变形杆菌（Proteus vulgaris）;啤酒酵母（Saccharomy cescerevisiae）的作用表明,卵叶娃儿藤总生物碱对这6种菌具有很好的抑制作用。

全文目录


摘要  4-6
Abstract  6-14
第1章 引言  14-30
  1.1 卵叶娃儿藤研究进展  14-15
    1.1.1 卵叶娃儿藤植物概述  14
    1.1.2 别名和产地  14
    1.1.3 外在形态  14-15
    1.1.4 采收  15
    1.1.5 性味及功效  15
    1.1.6 理化鉴别  15
  1.2 卵叶娃儿藤化学成分研究进展  15-16
    1.2.1 生物碱类化合物  16
    1.2.2 其它化学成分  16
  1.3 卵叶娃儿藤药理研究进展  16-18
    1.3.1 抗肿瘤作用  16-17
    1.3.2 抗菌、抗炎作用  17
    1.3.3 抑制中枢神经作用  17-18
    1.3.4 其它作用  18
  1.4 生物碱提取方法的研究进展  18-22
    1.4.1 传统提取方法概述  18-19
    1.4.2 超临界流体萃取技术简述  19-22
  1.5 生物碱分离纯化方法的研究进展  22-25
    1.5.1 有机溶剂萃取  22
    1.5.2 色谱法  22-23
    1.5.3 离子交换树脂分离法  23
    1.5.4 高速逆流色谱分离法  23-24
    1.5.5 分子印迹  24
    1.5.6 膜分离  24-25
  1.6 生物碱分析方法研究进展  25-28
    1.6.1 流动注射化学发光分析法  25
    1.6.2 薄层色谱法  25
    1.6.3 气相色谱法  25-26
    1.6.4 液相色谱法  26
    1.6.5 质谱法  26-27
    1.6.6 近红外光谱法  27
    1.6.7 核磁共振法  27
    1.6.8 色谱联用技术  27-28
  1.7 本文主要研究内容、创新点和科学意义  28-30
    1.7.1 主要研究内容及创新点  28
    1.7.2 本研究工作的科学意义  28-30
第2章 卵叶娃儿藤主要营养成分研究  30-39
  2.1 引言  30
  2.2 实验部分  30-34
    2.2.1 实验材料  30-31
    2.2.2 实验方法  31-34
  2.3 结果与讨论  34-37
    2.3.1 基本营养成分  34
    2.3.2 GC-MS分析结果与讨论  34-37
  2.4 本章小结  37-39
第3章 卵叶娃儿藤总生物碱含量测定  39-52
  3.1 引言  39
  3.2 实验部分  39-43
    3.2.1 实验仪器、试剂与材料  39-40
    3.2.2 实验方法  40-43
  3.3 结果与讨论  43-51
    3.3.1 卵叶娃儿藤生物碱的检验  43
    3.3.2 酸性染料种类及测定波长的选择  43-46
    3.3.3 最佳测试条件的选择  46-49
    3.3.4 方法学考察  49-51
  3.4 本章小结  51-52
第4章 卵叶娃儿藤总生物碱的提取工艺优化  52-70
  4.1 引言  52
  4.2 实验部分  52-56
    4.2.1 实验材料与试剂  52
    4.2.2 实验设备  52-53
    4.2.3 实验方法  53-56
  4.3 结果与讨论  56-69
    4.3.1 溶剂提取法  56-60
    4.3.2 超临界CO_2提取  60-65
    4.3.3 微波辅助萃取  65-69
  4.4 本章小结  69-70
第5章 卵叶娃儿藤中生物碱的分离纯化及结构鉴定  70-86
  5.1 引言  70
  5.2 实验部分  70-74
    5.2.1 实验材料  70-71
    5.2.2 实验设备  71
    5.2.3 实验方法  71-74
  5.3 结果与讨论  74-84
    5.3.1 LC-MS联用技术分析结果  74-77
    5.3.2 单体的分离纯化  77
    5.3.3 单体的高效液相色谱检测  77-79
    5.3.4 化合物1的结构鉴定  79-83
    5.3.5 化合物2的组分分析  83-84
  5.4 本章小结  84-86
第6章 卵叶娃儿藤生物碱的抑菌和抗肿瘤实验  86-96
  6.1 引言  86
  6.2 实验部分  86-89
    6.2.1 实验仪器与材料  86-87
    6.2.2 实验方法  87-89
  6.3 结果与讨论  89-95
    6.3.1 抗菌谱的测定  89-90
    6.3.2 Hela细胞最佳实验密度选择结果  90-91
    6.3.3 娃儿藤生物碱对Hela细胞的细胞毒作用  91-93
    6.3.4 讨论  93-95
  6.4 本章小结  95-96
第7章 结论  96-99
对本课题今后研究方向的建议  99-100
致谢  100-101
参考文献  101-106
攻读学位期间的研究成果  106

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药化学 > 有效成分的分离与提取
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