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适用于小麦叶片蛋白质组分析的双向电泳技术体系的建立

作　者: 刘伟霞
导　师: 潘映红
学　校: 中国农业科学院
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 小麦叶片 蛋白质组 样品制备 双向电泳 肽质量指纹谱
分类号: Q946
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要


样品制备是决定2-DE分辨率和重复性的关键因素之一。在植物蛋白质组研究中，植物组织由于本身特有的特点，使其蛋白提取比动物、微生物的更复杂，目前大多使用TCA／丙酮法提取植物组织总蛋白，但该法缺点是沉淀的蛋白复溶难及蛋白损失较多，建立适用于小麦叶片蛋白质组分析的样品制备方法势在必行。以小麦Taichung29苗期叶片为材料，首先通过单向SDS-PAGE筛选比较3种较简单的蛋白样品制备方法：TCA／丙酮法、改进的酚提取—甲醇／醋酸铵沉淀法及尿素／硫脲提取法提取法，然后选用蛋白丢失少的制备方法进行双向电泳分离和胶体考染，并选取代表性的蛋白点进行质谱分析及数据库比对，分析评价其提取分离蛋白能力的差别，为抗条锈比较蛋白质组学研究奠定基础。实验结果表明，三种方法提取的小麦叶片蛋白经SDS-PAGE分离后条带数目、位置以及染色深浅均有较大差异。采用改进的酚提取—甲醇／醋酸铵沉淀法及尿素／硫脲提取法提取的总蛋白，经pH3-10／pH4-7 IPG胶条等电聚焦，SDS-PAGE分离，可检测到较多的蛋白点数，分别为1016±203、1014±281和1563±37、1555±280。在pH3-10范围内，与尿素／硫脲提取法相比，酚提取—甲醇／醋酸铵沉淀法能较好地检测到碱性区域的蛋白点；尿素／硫脲提取法利于分子量大于70kDa的蛋白分离。在pH4-7范围内，尿素／硫脲提取法在酸性端能分离出数个特异蛋白点，与酚提取—甲醇／醋酸铵沉淀法相比，能相对较多的溶解分离出某些蛋白点；酚提取—甲醇／醋酸铵沉淀法在高分子量区分离的蛋白点数又好于尿素／硫脲提取法。进行肽质量指纹谱分析时，这两种样品制备方法获取的蛋白谱峰图基线平稳，噪音极低，说明本实验提供的技术体系与质谱兼容性好。本文提供的两种小麦叶片样品制备方法，可分离检测到较多的小麦叶片蛋白点，并与质谱兼容性好，有助于小麦叶片蛋白质组研究的开展。

全文目录


摘要  6-7
Abstract  7-11
第一章 文献综述  11-27
  1.1 蛋白质组概论  11-19
    1.1.1 蛋白质组研究方向  11
    1.1.2 蛋白质组研究技术  11-17
    1.1.3 蛋白质组发展方向  17-18
    1.1.4 蛋白质组小结  18-19
  1.2 双向凝胶电泳技术概论  19-25
    1.2.1 双向凝胶电泳技术的分析评价  20-22
    1.2.2 双向凝胶电泳技术研究进展  22-24
    1.2.3 2-DE小结  24
    1.2.4 双向凝胶电泳技术在农业生物蛋自质组研究中的应用  24-25
  1.3 研究目的及意义  25-27
第二章 小麦品种 Taichung29叶片蛋白制备方法的筛选  27-32
  2.1 材料与方法  27-31
    2.1.1 实验材料  27
    2.1.2 实验方法  27-31
  2.2 实验结果  31-32
    2.2.1 1D SDS-PAGE结果  31-32
第三章 小麦品种 Taichung29叶片蛋白质组的pH3-10双向电泳分离及肽质量指纹谱分析  32-44
  3.1 材料与方法  32-35
    3.1.1 实验材料  32
    3.1.2 实验方法  32-35
  3.2 2-DE结果  35-39
    3.2.1 pH3-10/2-DE胶重复性分析  35-36
    3.2.2 pH3-10/2-DE结果  36-39
  3.3 质谱鉴定及数据库比对结果  39-44
    3.3.1 pH3-10质谱鉴定及数据库比对结果  39-44
第四章 小麦品种 Taichung29叶片蛋白质组的pH4-7双向电泳分离及肽质量指纹谱分析  44-65
  4.1 材料与方法  44
  4.2 实验结果  44-65
    4.2.1 pH4-7/2-DE结果  44-47
    4.2.2 pH4-7质谱鉴定及数据库比对结果  47-65
第五章 全文讨论  65-67
  5.1 讨论  65-67
    5.1.1 1D SDS-PAGE  65
    5.1.2 2-DE  65-66
    5.1.3 胶内酶切  66
    5.1.4 质谱鉴定及数据库鉴定结果  66
    5.1.5 其它方面  66-67
第六章 全文结论  67-68
参考文献  68-75
致谢  75-76
作者简历  76

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中图分类: > 生物科学 > 植物学 > 植物生物化学
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