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小鼠小肠隐窝素基因的表达及大黄对其表达的影响

作　者: 刘中武
导　师: 张正
学　校: 四川大学
专　业: 内科学
关键词: 隐窝素大黄小鼠基因 PCR 肠道屏障
分类号: R574.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
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内容摘要

目的：检测小鼠小肠隐窝素基因(mRNA)的表达；观察大黄对小鼠小肠隐窝素基因表达的影响，探讨大黄增强肠道屏障作用的机理。方法：(1)检测小鼠小肠隐窝素基因(mRNA)的表达：将10只健康成熟昆明小鼠分为Cr1组和Cr4组。用颈椎脱臼法处死各鼠，分别切取各小鼠十二指肠、空肠、回肠标本，以生理盐水洗净血渍及粪便，用电子天平准确称量40mg各段小肠；按E．Z．N．A．(?)Total RNA Kit试剂盒提供的操作说明提取总mRNA；采用One Step RNA PCR Kit(AMV)试剂盒，按以下条件进行RT-PCR扩增：①50℃x30分钟；②94℃x2分钟；[③94℃x40秒；④60℃x40秒；⑤72℃x40秒]x30个循环；⑥72℃x5分钟；扩增后的PCR产物于1.5％的琼脂糖凝胶中，在90V恒压下进行电泳；以100bp Ladder DNA Marker为参照，运用美国Bio-Rad PAC型凝胶成像分析系统测出各靶条带的含量；按PCR产物纯化试剂盒提供的操作说明进行PCR产物纯化，纯化后的产物送基康公司进行DNA序列分析。(2)观察大黄对小鼠小肠隐窝素基因表达的影响：将20只健康的昆明小鼠随机分为实验组和对照组，实验组给予10％大黄煎剂灌胃，每次0.5ml,每6小时一次，对照组给予等量生理盐水，24小时后用颈椎脱臼法处死各鼠，剖腹切取小肠，以生理盐水洗净血渍及粪便，量长称重，用电子天平准确称量40mg各鼠小肠。然后按“(l)”中的相应步骤进行操作。结果:①正常小鼠小肠各段均有隐窝素基因的表达，各肠段间隐窝素一l基因(mRNA)表达量差异无统计学意义，P>0.05(F二0.9531，沙;二2，沙:=8);②各肠段间隐窝素一4基因(mRNA)表达量差异有统计学意义，P<0.01(F=35.661，分l=2，沙:=8)，将各肠段间隐窝素一4基因(mRNA)表达量的均数(十二指肠一2 13 .5 5 Ing/sul;空肠一29 1 .1 sgngzsul;回肠一423.179ng/sul)进行两两比较，经q检验，p值均小于0.01，差异均具有统计学意义，(回肠段与空肠段比较q一7.436;回肠段与十二指肠段比较q二n.sll;空肠段与十二指肠段比较q二4.374);③实验组和对照组小鼠在体重(t=l .289)、小肠长度(t=0.081)、小肠重量(t=o.358)方面相比较差异均无统计学意义，P值均大于0.20(沙=18);④实验组与对照组小鼠小肠隐窝素一1基因(mRNA)表达量的均数相比，实验组(427.087ng/sul)略高于对照组(409.223ng/sul)，但差异无统计学意义(t=2 .567 0.1<P<0.2);⑤实验组和对照组小鼠小肠隐窝素一4基因(mRNA)表达量差异无统计学意义(t=0.O43P>0.5)。⑥隐窝素一l基因和隐窝素一4基因表达量的相关关系无统计学意义。结论:①正常小鼠小肠各段均有隐窝素基因的表达，隐窝素一4基因(mRNA)表达量在十二指肠段最低，空肠段次之，回肠段最高;而隐窝素一1基因(mRNA)表达量在各肠段间基本一致。②用大黄刺激小鼠后，小肠隐窝素一1基因表达量有增加，但与对照组差别无显著性;大黄似乎不影响小鼠小肠隐窝素一4基因的表达。③小鼠小肠隐窝素一1基因和隐窝素一4基因表达无数量依存关系。

全文目录

中文摘要  4-7
英文摘要  7-11
前言  11-13
第一部分小鼠小肠隐窝素基因表达的检测  13-29
  一材料与方法  13-21
  二结果  21-26
  三讨论  26-28
  四结论  28-29
第二部分大黄对小鼠小肠隐窝素基因表达的影响  29-37
  一材料与方法  29-30
  二结果  30-34
  三讨论  34-36
  四结论  36-37
参考文献  37-49
文献综述  49-61
  参考文献  55-61
致谢  61

小鼠小肠隐窝素基因的表达及大黄对其表达的影响

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