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幽门螺杆菌ureI核酸疫苗的构建及其免疫活性初步研究

作　者: 李杰
导　师: 张艳
学　校: 南华大学
专　业: 病原生物学
关键词: 幽门螺杆菌 ureI 核酸疫苗免疫活性
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:构建幽门螺杆菌尿素通道蛋白UreI的真核表达载体pcDNA3.1(+)/ureI,并在HeLa细胞中进行表达。通过肌肉注射免疫C57BL/6小鼠,观察其所产生的体液免疫和细胞免疫应答水平,为研制高效、新型的幽门螺杆菌核酸疫苗提供实验依据。方法:用PRIMER5.0软件设计引物, PCR扩增ureI基因,将该基因酶切插入pcDNA3.1(+)真核细胞表达载体构建pcDNA3.1(+)/ureI重组载体,并转染HeLa细胞,用Western-blot观察鉴定其在真核细胞得到表达后,将核酸疫苗pcDNA3.1(+)/ureI、对照空质粒pcDNA3.1(+)及PBS分组通过肌肉注射免疫6w龄C57BL/6小鼠,隔周免疫一次,共免疫四次。ELISA间接法测定小鼠血清中特异性IgG抗体水平,ELISA双抗体夹心法检测脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ、IL-4水平,MTT比色法检测脾淋巴细胞增殖反应,免疫荧光组化法检测ureI在小鼠肌肉组织中的表达情况,通过PCR法检测小鼠肌细胞中ureI基因的存在。结果:(1)成功构建了pcDNA3.1(+)/ureI真核表达载体,且重组质粒能在HeLa细胞内有效表达目的蛋白,且免疫荧光组化法检测ureI在小鼠肌肉组织中能够有效表达。(2)小鼠接种pcDNA3.1(+)/ureI核酸疫苗后能产生特异性IgG抗体,10w后ELISA测定血清抗体A450值为1.249,效价为1:2048。(3)核酸疫苗pcDNA3.1(+)/ureI免疫组小鼠脾淋巴细胞经特异性抗原刺激后,培养上清中IFN-γ、IL-4含量明显升高[分别为(275.20±43.21)pg/mL,(436.5±68.97) pg/mL)],与空质粒组[分别为(18.30±5.32 )pg/mL,(40.10±18.54)pg/mL]之间差异具有显著性(P<0.01)。(4)脾淋巴细胞增殖反应测定:pcDNA3.1(+)/ureI核酸疫苗组小鼠脾淋巴细胞经特异性抗原刺激后,刺激指数(1.76±0.16)明显高于空质粒组(1.20±0.14)和PBS组(1.14±0.12)(P<0.01)。(5)PCR检测ureI基因可在小鼠肌细胞中存在。结论:(1)成功构建了pcDNA3.1(+)/ureI真核表达载体且其能在真核细胞中表达。(2) pcDNA3.1(+)/ureI核酸疫苗能刺激机体产生较强细胞免疫应答和体液免疫应答。(3) pcDNA3.1(+)/ureI核酸疫苗接种C57BL/6小鼠后能在肌细胞中存在。

全文目录

常用英文缩写  4-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
论文正文  10-37
  1 引言  10-12
  2 实验材料  12-15
  3 实验方法及步骤  15-26
  4 实验结果  26-32
  5 讨论  32-36
  6 结论  36-37
参考文献  37-40
附录  40-44
文献综述  44-49
发表及待发表论文  49-50
致谢  50

幽门螺杆菌ureI核酸疫苗的构建及其免疫活性初步研究

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