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高迁移率族蛋白B-1对溃疡性结肠炎小鼠结肠黏膜损伤的影响

作　者: 陆宗海
导　师: 林琳
学　校: 南京医科大学
专　业: 内科学
关键词: 溃疡性结肠炎 高迁移率族蛋白B-1 结肠通透性 结肠组织学评分 便血 小鼠
分类号: R574.62
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


炎症性肠病(inflammatory bowel diseases, IBD)尤其是溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)在我国的发病率呈逐年上升趋势,但其病因、发病机制尚不清楚。目前,免疫机制紊乱是该病的研究热点之一。大量研究已证实,各种细胞因子的交互作用,导致了炎症的发生及持续发展,在UC的发病中起着十分重要的作用。高迁移族蛋白B-1(high mobility group box -1, HMGB1)是一种参与细胞核内多种生物学功能的核内蛋白,新近研究发现它是一种新型的炎性细胞因子,与脓毒血症、出血性休克、急性肺损伤、类风湿性关节炎等密切相关。本试验旨在明确HMGB1是否也参与了小鼠溃疡性结肠炎的发生与发展。[目的]1.探讨UC小鼠结肠组织中HMGB1的变化。2.探讨UC小鼠结肠通透性的变化。3.探讨HMGB1抗体对小鼠溃疡性结肠炎的干预作用。[方法]1.建立UC小鼠模型、分组及干预:采用自由饮用3%DSS溶液建立UC小鼠模型;空白对照组自由饮用蒸馏水。72只BALB/c小鼠随机分为3组:①正常对照组(N组,n=12);②UC组(n=36),按模型制备的第1,4,7d分成3个亚组(UC1d组,UC4d组,UC7d组),均n =12只;③干预组(n=24),按干预药物不同分成2个亚组:UC+PBS组(n=12)和UC+ anti-HMGB1组(n=12)。造模的同时,分别给两组干预组以PBS(200ug/只×48h)和anti-HMGB1(200ug/只×48h)腹腔内注射,观察其对UC的作用。除UC1d组和UC4d组分别于造模的第1d和第4d处死外,其余各组均于造模的第7d处死。2.观察指标包括小鼠体重、粪便性状、便血、结肠长度、结肠组织学评分。留取所有小鼠结肠组织,用伊文思蓝(Evan’blue EB)检测结肠通透性。3.留取所有小鼠结肠组织,RT-PCR法检测结肠中HMGB1 mRNA的表达,Western Blot法测定结肠中HMGB1蛋白的表达。[结果]1.一般情况:①体重:与N组比较,UC组饮DSS水后,UC1d组小鼠体重增长(P>0.05),UC4d组小鼠体重下降(P>0.05),UC7d组,小鼠体重下降很明显(P <0.05)。②粪便性状:与N组比较,UC组饮DSS水4天后,粪便性状评分显著升高(P <0.05),且随病程延长,粪便性状评分有逐渐升高的趋势。③便血:与N组比较,UC组便血评分随病程延长逐渐升高,于第7天便血最严重(P <0.01)2.结肠大体病变:①结肠长度:与N组相比,造模后UC1d组结肠长度略缩短(P>0.05);UC4d组结肠长度缩短,仍无显著差异(P>0.05);UC7d组结肠长度明显缩短(P<0.05)。②结肠组织学评分:与N相比,造模后UC1d组评分略升高,无明显差异(P>0.05),UC4d组、UC7d组评分显著升高(P<0.05)。3.结肠通透性:与N组相比,造模后UC1d组结肠通透性略升高,无显著差异(P>0.05),UC4d组、UC7d组结肠通透性显著升高(P<0.05)。4.小鼠结肠组织HMGB1表达:①HMGB1-mRNA:正常小鼠结肠组织HMGB1 mRNA低表达或不表达。与N组相比,造模后UC1d组结肠中HMGB1 mRNA表达略升高,无统计学差异(P>0.05),UC4d组、UC7d组HMGB1 mRNA表达显著升高,有显著差异(P<0.05)。②HMGB1蛋白:正常小鼠结肠组织HMGB1蛋白低表达。与N组相比,造模后UC1d组结肠中HMGB1蛋白表达略升高,无统计学差异(P>0.05),UC4d组、UC7d组HMGB1蛋白表达显著升高,有显著差异(P<0.05)。5. HMGB1表达与结肠通透性的相关性:①HMGB1 mRNA: UC 1d组,r=0.439,P=0.384;UC 4 d组,r=0.862,P=0.027;UC 7d组,r=0.948,P=0.004;②HMGB1蛋白:UC 1d组,r=0.468,P=0.35;UC 4d组,r=0.739,P=0.039;UC 7d组,r=0.941,P=0.005。6. HMGB1抗体的干预1w后:①体重:与N组比较,UC+PBS组体重显著下降(P<0.05),UC+ anti-HMGB1组较UC+PBS组显著增加(P<0.05),与N组无显著差异(P>0.05)。②粪便性状:与N组比较,UC+PBS组粪便性状评分显著增加(P<0.05),UC+anti-HMGB1组较UC+PBS组显著下降(P<0.05),仍高于N组(P<0.05)。③便血:与N组比较,UC+PBS组便血评分显著增加(P<0.05),UC+anti-HMGB1组较UC+PBS组显著下降(P<0.05),仍高于N组(P<0.05)。④结肠长度:与N组比较,UC+PBS组结肠显著缩短(P<0.05),UC+anti-HMGB1组较UC+PBS组显著增加(P<0.05),仍短于N组(P<0.05)。⑤结肠组织学评分:与N组比较,UC+PBS组评分显著增加(P<0.05),UC+anti-HMGB1组较UC+PBS组显著降低(P<0.05),仍高于N组(P<0.05)。⑥结肠通透性:与N组比较,UC+PBS组结肠通透性显著增加(P<0.05),UC+anti-HMGB1组较UC+PBS组显著降低(P<0.05),仍高于N组(P<0.05)。[结论]1.饮用DSS 7天时UC组小鼠体重明显下降、粪便性状评分、便血评分明显升高,结肠组织学评分显著增加,与急性UC患者的临床表现基本相符,提示UC小鼠模型已建立。2. UC小鼠结肠HMGB1表达明显增高,且与结肠通透性增高呈时间依赖性正相关,提示HMGB1在UC的结肠黏膜屏障损伤中起重要作用。3.早期应用anti-HMGB1抗体干预UC小鼠,可以缓解其血便、体重下降的症状,亦使结肠炎症好转、降低结肠黏膜通透性,提示早期应用anti-HMGB1抗体干预对UC的结肠黏膜屏障修复有一定的作用。

全文目录


中文摘要  4-7
英文摘要  7-11
前言  11-16
  参考文献  13-16
第一部分 溃疡性结肠炎小鼠模型的建立  16-26
  材料和方法  16-20
  结果  20-22
  讨论  22-24
  参考文献  24-26
第二部分 高迁移率族蛋白B-1 在溃疡性结肠炎小鼠结肠中的表达及其与肠黏膜屏障损伤的关系  26-44
  材料与方法  26-36
  结果  36-40
  讨论  40-42
  参考文献  42-44
第三部分 高迁移率族蛋白B-1 抗体干预对小鼠溃疡性结肠炎的预防作用  44-61
  材料和方法  44-55
  结果  55-59
  讨论  59-60
  参考文献  60-61
小结  61-62
附录  62-64
综述  64-74
  参考文献  70-74
发表文章  74-79
致谢  79

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 消化系及腹部疾病 > 肠疾病 > 大肠疾病 > 结肠疾病
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