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RUNX3在宫颈癌组织中的表达及其对宫颈癌Hela细胞增殖活性的影响

作　者: 杨潇
导　师: 辛晓燕
学　校: 第四军医大学
专　业: 妇产科学
关键词: RUNX3 宫颈癌 CIN 5-Aza-CdR Hela细胞
分类号: R737.33
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


研究背景:宫颈癌(Cervical Cancer)是发展中国家妇女最常见的恶性肿瘤之一,其发病率已成为女性生殖系统恶性肿瘤的首位,严重威胁女性的健康及生命。近年来,随着社会生活的变化,宫颈癌的发病率呈现明显的年轻化趋势,它的危害性不容忽视。从正常的宫颈上皮,到宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN),直至宫颈癌是一个长期的、复杂的发展过程,对其病因学的研究一直是国内外的热点,它的发病机制至今尚未完全阐明。学者们普遍认为高危型HPV(human papillomaviruses,人乳头瘤病毒)感染是其主要病因,但并非唯一因素,而是多种致病因素共同作用的结果。许多国内外研究表明,宫颈癌的发生与抑癌基因有着密切的关系。人类runt相关转录因子3(runt-related transcription factor gene 3,RUNX3)是近年来发现的一个新的抑癌基因,是RUNX转录因子家族成员之一。近年来研究发现,它在胃癌、肺癌、胰腺癌、肝细胞癌、结直肠癌等多种肿瘤组织中的表达明显低于正常组织,且与肿瘤的分化程度相关。肿瘤的恶性程度越高,其表达量越低。RUNX3基因在肿瘤的发生、发展、转移以及预后等多个方面的研究已成为国内外的热点问题。RUNX3基因的表达沉默或下调通常伴随着肿瘤的发生,并且表达水平与恶性肿瘤的临床分期、细胞分化程度、癌细胞是否转移等情况密切相关。而RUNX3基因与宫颈癌的关系目前尚未见报道。国内外研究表明,RUNX3基因的启动子CPG岛的高甲基化是其主要失活机制。5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)是一种DNA甲基转移酶抑制剂,它能通过去甲基化作用使抑癌基因重新表达并恢复抑癌功能。因此,本课题旨在通过研究抑癌基因RUNX3在宫颈癌组织中的表达情况,揭示RUNX3基因在宫颈癌发生、发展过程中的作用,并通过发挥5-氮杂-2’-脱氧胞苷的去甲基化作用使RUNX3基因恢复表达来进一步探讨RUNX3基因对宫颈癌Hela细胞增殖活性的影响。研究目的:1.从组织水平探讨抑癌基因RUNX3在宫颈不同病理状态下表达水平的差异性,探讨其与宫颈癌的关系;2.通过DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷诱导宫颈癌Hela细胞恢复RUNX3基因表达后,观察Hela细胞增殖能力及凋亡等生物学行为的变化,进一步探讨RUNX3与宫颈癌发生、发展的关系,为宫颈癌的早期诊断和治疗提供实验依据。研究方法:1.依次采用免疫组织化学法、Western Blotting方法及半定量RT-PCR法检测宫颈癌、宫颈上皮内瘤变(CIN)及正常宫颈组织中RUNX3的表达情况。2.用5-氮杂-2’-脱氧胞苷处理宫颈癌Hela细胞,采用半定量RT-PCR方法检测RUNX3基因表达情况,并通过MTT法、流式细胞仪技术及克隆形成实验分析肿瘤细胞的生物学行为的变化。研究结果:1.免疫组化结果提示,RUNX3蛋白在宫颈癌组织中呈现低表达,与宫颈上皮内瘤变、正常宫颈上皮组表达水平三者比较有统计学差异(P<0.05);在宫颈癌临床分期Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期中表达水平呈现递减趋势,且三者之间存在统计学差异(P<0.05);淋巴结转移组RUNX3蛋白低表达,与未转移组比较差异有统计学意义(P<0.05);2.通过蛋白印迹实验,证实RUNX3蛋白在宫颈癌组织中低表达,与正常宫颈上皮组相比有统计学差异(P<0.05);3.半定量RT-PCR结果显示,RUNX3 mRNA在宫颈癌组织中低表达,与正常宫颈上皮组相比有统计学差异(P<0.05);4.对照组Hela细胞未能检测到RUNX3 mRNA的表达,而经过5-Aza-CdR处理后Hela细胞RUNX3 mRNA则恢复表达,表达水平与用药剂量存在着量效关系;5.经过5-Aza-CdR处理后,Hela细胞的生长增值活性明显抑制,并且随着5-Aza-CdR的浓度增加其抑制的量效关系明显;6.经5-Aza-CdR处理后,Hela细胞凋亡率增高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);7.经5-Aza-CdR处理后的Hela细胞克隆形成数量明显减少,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1. RUNX3基因在宫颈癌组织中低表达,并与肿瘤的分期、转移密切相关。2. 5-Aza-CdR作用Hela细胞后,RUNX3基因mRNA的表达恢复,引起了Hela细胞增殖能力下降,促进了细胞的凋亡。

全文目录


缩略语表  5-7
中文摘要  7-10
英文摘要  10-14
前言  14-16
文献回顾  16-27
实验一 RUNX3 在宫颈癌组织中的表达  27-43
  引言  27
  1 材料  27-31
    1.1 组织标本  27-28
    1.2 引物  28
    1.3 主要仪器和试剂  28-31
  2 方法  31-37
  3 结果  37-41
  4 讨论  41-43
实验二 5-氮杂-2'-脱氧胞苷激活宫颈癌HELA细胞 RUNX3 基因表达及对细胞增殖活性的影响  43-57
  引言  43
  1 材料  43-46
  2 方法  46-51
  3 结果  51-55
  4 讨论  55-57
小结  57-58
参考文献  58-64
个人简历和研究成果  64-65
致谢  65

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 女性生殖器肿瘤 > 子宫肿瘤
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