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先天性白内障致病基因HSF4功能研究

作　者: 李端琢
导　师: 任翔
学　校: 华中科技大学
专　业: 遗传学
关键词: 白内障人晶状体上皮细胞热休克因子4 共聚焦显微技术
分类号: R776.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

HSF4属于热休克因子(HSF)家族,HSF在细胞遭受生存压力时会激活其靶基因。它的突变可以引起常染色体显性和隐性的先天性白内障。HSF4b蛋白是HSF4在晶状体中主要的剪切本。迄今为止,关于HSF4b蛋白的突变导致先天性白内障的机理还不清楚。本实验室自HLE(人晶状体上皮细胞)细胞中得到了HSF4b蛋白的cDNA。我将其重组进pEGFP-N1载体,转染HLE细胞,使用共聚焦显微镜观察发现HSF4b在细胞核内呈点状聚集。因其定位方式与剪接体类似,而且文献报道剪接体中的SC35可与某些转录因子相互作用,我们假设同为转录因子的HSF4b也可能与之相互作用。但将HSF4b和SC35接上不同的荧光标记载体,共转HLE细胞,发现它们不是共定位。而后,我选择了另外两个亚细胞核结构中的标记分子——coilin和γ-H2AX,它们分别是卡侯氏体和DNA损伤修复位点的标记分子,但免疫荧光实验证实它们与HSF4b也不是共定位。对于HSF4b这种全新的定位方式,我们将尝试其他的Nuclear domains,测试它们与之是否共定位,如果能共定位,我们可以利用这种已知Nuclear domains的研究成果,通过它来发现HSF4b的功能。如果证明HSF4b不与所有的Nuclear domains共定位,这说明它代表了一种新的Nuclear domains,我们将尝试其他方法寻找HSF4b相互做用的蛋白或其他分子,理解这种新的Nuclear domains的功能,以及它在细胞和晶状体中的功能。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-7
1 前言  7-20
  1.1 先天性白内障及其研究概述  7-12
  1.2 热休克因子（HSF）及其研究概述  12-13
  1.3 亚细胞核结构(nuclear domains)  13-15
  1.4 主要实验技术原理  15-20
2 材料与方法  20-38
  2.1 实验材料  20-27
  2.2 实验方法  27-38
3 结果讨论  38-43
  3.1 实验结果  38-41
  3.2 实验讨论  41-42
  3.3 总结和展望  42-43
致谢  43-44
参考文献  44-46

先天性白内障致病基因HSF4功能研究

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