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猪链球菌分子分型新方法研究及健康猪群猪链球菌菌株耐药性检测

作　者: 邢娟
导　师: 柳纪省；胡永浩
学　校: 甘肃农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 猪链球菌 分型方法 药敏试验 毒力岛
分类号: S858.28
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 120次
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内容摘要


根据国外当前的多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)法,我国分离的猪链球菌S. suis 98HAH33和05ZYH33株属于序列7(sequence type 7,ST7)型。但S. suis 98HAH33和05ZYH33在7个猪链球菌MLST基因序列上的基因分子特征却与MLST ST7型其它猪链球菌分离株的基因分子特征不相吻合。鉴于上述原因,本研究尝试建立一种新的分型方法,力求同一型内的菌株在ST和基因分子特征方面获得一致。本研究首先从基因组上随机选择6个保守的酶基因和1个CPS基因,截取其500-750bp的保守片段。由于相关研究认为GenBank上发表的S. suis 98HAH33和S. suis 05ZYH33基因组序列存在较多的错误,所以,我们首先对本课题保存的S. suis 98HAH33和S. suis 05ZYH33菌株上的相关基因测序,以求得到准确的测序结果。同时,从GenBank上下载S. suis BM407,S. suis P1/7,S. suis SC84相关序列。之后,按C76和C77组合,将其按6或7片段连接起来,通过DNASTAR软件MegAlign建立遗传树。该分型法对所得的8个分型图均表明,S. suis 98HAH33、S. suis 05ZYH33均应归属于MLST ST1型,分型结果与S. suis 98HAH33、S. suis05ZYH33的基因分子特征完全吻合。同时,本研究从甘肃省部分地区采集到的152份健康猪扁桃体分离猪链球菌,共分离到67株猪链球菌菌株,分离率约44%。对67株猪链球菌菌株所作的耐药性检测表明,全部猪链球菌分离株具有多重耐药性,最严重者,对22种抗生素中的16种抗生素产生耐药性。用我国致病性2型猪链球菌特有的89k毒力岛序列特异性引物对67株猪链球菌进行PCR鉴定,仅发现一株猪链球菌分离株能够扩增出该特异性片段,提示在该地区健康猪群中少数猪可能隐性感染致病性2型猪链球菌病。

全文目录


摘要  3-4
SUMMARY  4-7
缩写词英汉对照表  7-8
第一篇 猪链球菌流行毒株分子分型研究及甘肃省健康 猪群猪链球菌分离株耐药性检测  8-38
  第一章 猪链球菌分子分型新方法研究  9-28
    前言  10-11
    1 材料与方法  11-21
      1.1 实验材料  11
      1.2 实验方法  11-19
      1.3 PCR 结果及鉴定  19-21
    2 结果  21-25
      2.1 测序结果  21
      2.2 基因修正  21-23
      2.3 遗传树的建立  23-25
    3 分析与讨论  25-28
      3.1 基因选择分析  25-26
      3.2 遗传树比较结果分析  26-28
  第二章 甘肃省健康猪群猪链球菌耐药性检测  28-37
    前言  29
    1 材料与方法  29-33
      1.1 实验材料  29-30
      1.2 实验方法  30-33
    2 结果与分析  33-35
      2.1 猪链球菌菌株分离状况  33
      2.2 药敏试验结果  33-34
      2.3 67 株猪链球菌的多重耐药情况  34-35
      2.4 健康猪群猪链球菌分离株中致病毒株的 PCR 检测  35
    3 小结和讨论  35-37
  第三章 结论  37-38
第二篇 文献综述  38-59
  第四章 猪链球菌研究进展  39-49
    前言  39-40
    1 猪链球菌毒力因子  40-44
      1.1 荚膜多糖  40-41
      1.2 MRP 和 EF  41-42
      1.3 溶血素  42-43
      1.4 粘附素  43
      1.5 IGG 结合蛋白  43
      1.6 新发现的毒力因子  43-44
    2 猪链球菌毒力岛研究进展  44-45
    3 细菌耐药机理的研究进展  45-47
      3.1 耐药基因  45-47
      3.2 猪链球菌的耐药性  47
    4 研究目的和意义  47-49
  第五章 猪链球菌鉴定分型方法研究进展  49-59
    前言  49
    1 生化鉴定  49-50
    2 血清学分型  50-51
    3 分子生物学分型方法  51-57
      3.1 随机扩增核酸片段多态性分析  51
      3.2 多位点酶电泳法  51-52
      3.3 ELISA  52
      3.4 原位杂交  52-53
      3.5 限制性内切酶图谱分析法  53
      3.6 限制性片段长度多态性分析  53
      3.7 PCR 鉴定  53-54
      3.8 基因芯片技术  54-55
      3.9 核糖体分型研究  55-56
      3.10 脉冲场凝胶电泳法  56-57
      3.11 多位点序列分型技术  57
    4 小结  57-59
致谢  59-60
参考文献  60-66
附录  66-86
作者简介  86-87
导师简介  87-88

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 各种家畜、家禽、野生动物的疾 > 家畜 > 猪
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