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猪链球菌2型分离株生物学特性及其主要毒力基因序列分析

作　者: 应薇芳
导　师: 方维焕
学　校: 浙江大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 屠宰猪 猪链球菌2型 生物学特性 主要毒力基因
分类号: S852.61
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 55次
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内容摘要


猪链球菌是一种能引起猪发生脑膜炎、心内膜炎和关节炎等疾病的病原菌。猪链球菌根据其荚膜多糖抗原可分为35个血清型,其中2型是毒力最强、流行最广的血清型,是一种引起人畜共患病的重要病原菌。了解生猪中猪链球菌的分布尤其是2型的携带情况、构建2型猪链球菌资源库以及建立预警体系,对该病的防制和保障相关从业人员的健康等方面具有重要意义。应用三重PCR和生化鉴定,对屠宰场中临床健康待宰猪中猪链球菌带菌的情况进行监测与分析,明确了不同来源地待宰猪中猪链球菌的携带情况。待宰猪中猪链球菌的分离率为24.0%(126／526),其中猪链球菌2型为0.57%(3／526)不同来源地待宰猪中猪链球菌的携带情况差异明显,来源于宁波地区的携带率最高为66.2%,其次为浙江义乌(21.0%)和浙江萧山(15.8%),来自江山地区猪中未检出猪链球菌。2型分离株分离自浙江萧山(2株)和河南(1株)来源的待宰猪。对猪链球菌2型分离株的主要生物学特征和毒力基因的分布情况研究,结果表明：分离株的生化特性和体外生长特性无明显差异；ZH0604对四环素、强力霉素、红霉素、麦迪霉素和克林霉素5种药物产生多重耐药现象；其他分离株的药敏性差异不大,对氨苄西林、阿莫西林、先锋V、西力新、头孢他啶、环丙沙星、恩诺沙星、庆大霉素、氟嗪酸和复方新诺明均敏感。ZH0604和参考株6035的溶血活性和对小鼠的致病力最弱(ZH0604和6035的LD50分别为109.08和108.75)；参考菌株5995溶血活性和对小鼠的毒力最强(LD50为107.81)。2型参考株和分离株(6株)都能扩增到sly、mrp和ef基因,且基因序列在各被测2型菌株中的同源性在98.1%-100%之间。本研究结果为了解临床健康屠宰猪中猪链球菌及其2型的分布和致病机理研究奠定了一定的基础。

全文目录


摘要  7-8
Abstract  8-9
前言  9-11
第一部分 文献综述  11-32
  第一章 猪链球菌的生物学特性及其流行病学研究进展  12-16
    1 生物学特征  12-13
    2 流行病学  13-15
      2.1 易感动物及临床表现  14
      2.2 传播途径  14
      2.3 流行季节与特征  14-15
      2.4 人感染猪链球菌的情况  15
    3 小结  15-16
  第二章 猪链球菌2型毒力因子的研究进展  16-25
    1、英膜多糖(CPS)  16-17
    2 溶菌酶释放蛋白(MRP)与细胞外蛋白因子(EF)  17-20
      2.1 溶菌酶释放蛋白(MRP)  17-19
      2.2 细胞外蛋白因子(EF)与细胞外蛋白因子类似物(EF~*)  19-20
    3 溶血素(SLY)  20-21
    4 蛋白质片段  21-22
    5、粘附素  22
    6 IgG结合蛋白  22
    7 orf2  22-23
    8 谷氨酸盐脱氢酶(GDH)  23
    9 不断发现中的新的毒力因子  23-25
      9.1 基因水平的研究  23-25
      9.2 蛋白质水平的研究  25
    10.小结  25
  参考文献  25-32
第二部分:实验研究  32-62
  第一章 屠宰场猪链球菌流行情况的调查  33-43
    1 材料与方法  33-35
      1.1 参考菌株、培养基、试剂与仪器  33-34
      1.2 采样时间  34
      1.3 采样方法  34
      1.4 猪链球菌的分离鉴定  34-35
    2 结果  35-41
      2.1 屠宰场待屠猪携带猪链球菌的情况  35
      2.2 猪链球菌鉴定  35-41
    3 讨论  41
    参考文献  41-43
  第二章 猪链球菌2型分离株主要生物学特性的研究  43-52
    1 材料和方法  43-45
      1.1 菌株  43-44
      1.2 试验动物  44
      1.3 主要试剂  44
      1.4 主要生化特性  44
      1.5 体外生长试验  44
      1.6 药敏试验  44-45
      1.7 小鼠体毒力试验  45
      1.8 溶血活性比较  45
    2 结果  45-49
      2.1 主要生化特性  45
      2.2 体外生长特性  45-46
      2.3 药敏性  46
      2.4 对小鼠体的毒力  46-48
      2.5 溶血活性与生长期  48-49
    3 结论  49-50
    参考文献  50-52
  第三章 猪链球菌2型分离株主要毒力基因的克隆及序列分析  52-62
    1 材料和方法  53-54
      1.1 菌株、质粒及培养基  53
      1.2 工具酶和试剂  53
      1.3 sly和mrp短片段的PCR扩增、纯化和序列分析  53-54
      1.4 ef短片段的PCR扩增、克隆和序列分析  54
    2 结果  54-58
      2.1 sly、mrp和ef的PCR扩增  54-55
      2.2 sly、mrp和ef的序列分析  55-58
    3 讨论  58-60
    参考文献  60-62
结论与建议  62-63
附录 常用缓冲液及培养基配方  63-65
致谢  65

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 兽医基础科学 > 家畜微生物学（兽医病原微生物学） > 病原细菌
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