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阴道毛滴虫病毒转染载体的构建及EGFP在阴道毛滴虫内的表达

作　者: 郭瑞娟
导　师: 李淑红
学　校: 吉林大学
专　业: 病原生物学
关键词: 阴道毛滴虫阴道毛滴虫病毒病毒载体 EGFP
分类号: R383
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 57次
引　用: 2次
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内容摘要

本研究根据我国阴道毛滴虫病毒基因组的序列特征,借鉴以往原虫病毒载体构建的研究经验,用绿色荧光蛋白编码基因替换TVV全部或部分编码区,构建阴道毛滴虫病毒转染载体pTVVL289/EGFP、pTVVL289/EGFP/TVVS、pTVVL559/EGFP/TVVS。阴道毛滴虫病毒转染载体经T7RNA聚合酶体外转录成mRNA后,经电穿孔法转染含TVV的阴道毛滴虫细胞内,用荧光显微镜观察转染后不同时间内EGFP的表达情况。结果表明:载体pTVVL289/EGFP的体外转录体转染阴道毛滴虫后未观察到荧光信号,表明在TVV的3’末端UTR存在有与病毒复制和/或包装有关的序列。载体pTVVL289/EGFP/TVVS、pTVVL559/EGFP/TVVS体外转录体转染后可检测到绿色荧光信号,并在持续传代培养5代后仍不减弱;提取转染后虫体的总核酸,用RT-PCR检测到EGFP的mRNA的存在;SDS-PAGE分析转染虫体的培养上清和虫体中EGFP的表达,检测到大小为27KD的蛋白。说明我们构建的阴道毛滴虫病毒载体可以应用于介导外源基因在阴道毛滴虫体内的表达。本研究构建了阴道毛滴虫病毒转染载体,介导了目的基因EGFP在阴道毛滴虫体内的表达,为深入研究我国阴道毛滴虫病毒与虫体及其宿主之间的关系提供了新的研究工具,为进一步研究阴道毛滴虫的分子生物学特性奠定基础。

全文目录

提要  4-5
英文缩写词表  5-9
引言  9-11
第一篇文献综述  11-20
  阴道毛滴虫病毒的研究进展  11-20
    1 阴道毛滴虫病毒的生物学特性  11-13
    2 阴道毛滴虫病毒的基因结构与功能  13-17
    3 阴道毛滴虫病毒与虫体及其宿主之间的关系  17-20
第二篇研究内容  20-52
  第一章阴道毛滴虫病毒表达载体的构建  20-37
    1 材料与方法  20-26
      1.1 材料  20-21
      1.2 方法  21-26
    2 结果  26-33
    3 讨论  33-36
    4 小结  36-37
  第二章绿色荧光蛋白在阴道毛滴虫体内的表达  37-52
    1 材料与方法  37-42
      1.1 材料  37-38
      1.2 方法  38-42
    2 结果  42-48
    3 讨论  48-50
    4 小结  50-52
结论  52-53
参考文献  53-59
附录阴道毛滴虫病毒转染载体构建策略图  59-60
中文摘要  60-62
英文摘要  62-64
致谢  64-65
导师及作者简介  65

阴道毛滴虫病毒转染载体的构建及EGFP在阴道毛滴虫内的表达

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