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人源抗人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）结构蛋白基因工程抗体的研究

作　者: 许四宏
导　师: 王佑春；梁米芳
学　校: 中国药品生物制品检定所
专　业: 病原生物学
关键词: HIV-1 人源基因工程抗体噬菌体展示技术链置换
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

目前，HIV-1感染的预防和控制对人类来说仍然是一个未解的难题。HIV-1为单链RNA病毒，属于逆转录病毒科(Retroviridae)，慢病毒亚科(Lentivirus)。该病毒为圆形或椭圆形，直径约90～140nm，外层为类脂包膜，表面有锯齿样突起，内有圆柱状核心，病毒的包膜是糖蛋白gp160(由gp120和gp41组成)，为该病毒的结构蛋白，其中gp120为外膜蛋白，gp41为跨膜蛋白(trans-membrane protein)。gp120与CD4结合后相互作用，引起gp120发生一系列构象变化，进而形成高亲和力的CCR5／CXCR4结合位点，协助HIV-1进入宿主细胞。结构蛋白还包括p24核心蛋白和p18基质蛋白。目前的许多研究表明，针对该病毒的中和表位主要存在于gp160。本课题运用噬菌体抗体库技术，以期获得人源抗HIV-1 gp160基因工程抗体。首先采集无症状、HIV-1抗体滴度高的HIV-1感染者全血，分离淋巴细胞后提取总RNA，反转录为cDNA第一链，然后利用一组人源抗体IgG1 Fab段基因的引物对抗体的轻链和重链Fd段基因进行PCR扩增，再将扩增后的轻链、重链基因先后克隆到pComb3X载体，转化XL1-Blue，在辅助噬菌体的辅助作用下，构建了噬菌体抗体库，库容为8×10~6，最后用预包被gp160的ELISA板对噬菌体抗体库进行筛选，经过三轮“吸附—洗脱—富集”的筛选过程，将获得的克隆进行诱导表达，表达产物经ELISA检测，结果获得11株抗HIV-1 Fab克隆。在pComb3X载体中，轻链和重链Fd基因的信号肽分别为ompA和pelB，以这两个信号肽为模板，分别设计了轻链和重链的测序引物，对所获得的11株阳性克隆的轻链和重链基因进行了测序。运用EMBL EBI数据库提供的ClustalW对所获得的轻链基因序列和重链基因序列进行了同源性比较，结果获得了10条轻链基因(κ、λ链各5条)，8条重链基因；通过与HIV序列数据库中的基因

全文目录

缩略词表  4-6
中文摘要  6-8
ABSTRACT  8-10
前言  10-13
材料和方法  13-29
结果  29-47
讨论  47-51
小结  51-52
附录Ⅰ:培养基的配制  52-54
附录Ⅱ:试剂的配制  54-56
参考文献  56-60
综述  60-79
致谢  79

人源抗人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）结构蛋白基因工程抗体的研究

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