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体内构建骨软骨复合体修复骨软骨缺损的实验研究

作　者: 王栋
导　师: 孙水
学　校: 山东大学
专　业: 骨科
关键词: 骨软骨缺损组织工程骨髓间充质干细胞 TGF-β1 PLGA支架骨软骨复合体软骨修复
分类号: R687
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

目的关节软骨损伤是骨科临床的常见疾病。人口老龄化引起的关节软骨磨损、退行性变和各种创伤、运动损伤造成的软骨损伤逐日增多，已经成为导致残废、影响生活质量的重要原因。20世纪80年代以来，组织工程技术的迅速发展，为这一难题的解决提供了前所未有的机遇。人们利用软骨组织工程技术，将细胞和支架材料复合培养，修复软骨缺损已经取得了初步成效。本课题研究的目的是采用软骨组织工程技术，体外分离骨髓间充质干细胞（MSCs）为种子细胞，经软骨细胞诱导生长因子的诱导培养后，与聚羟基乙酸（poly glycolic acid; PLA）一聚乳酸（poly lactic acid; PGA）共聚物（PLGA）支架材料复合培养，观察MSCs在PLGA支架材料上黏附、伸展和增殖情况，并模仿马赛克骨软骨移植术在关节骨软骨缺损深层置入MSC—支架复合体，浅层置入诱导培养后的MSC—支架复合体，紧密压配，体内构建骨软骨复合体，观察其修复的情况。期望能够找到软骨组织工程理想的种子细胞和支架材料。材料和方法 1 取10-12月龄健康比格犬3只，无菌穿刺抽取髂骨骨髓7-8ml，Percoll分离法分离骨髓间充质干细胞，进行原代、传代细胞培养。取第3代的MSCs，根据是否加入TGFβ₁，分为二组：A组，加入TGFβ₁10ng／ml；B组，对照组。二组中常规加入含10％胎牛血清的DMEM液。倒置相差显微镜观察细胞生长状况，诱导培养15天后，MTT法观察细胞增殖状况；细胞培养上清液检测糖胺聚糖的含量；免疫组化检测诱导细胞Ⅱ型胶原的分泌。观察骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的情况。 2 取经过诱导培养7天的MSCs，调整细胞浓度为5×10⁶／ml，与PLGA支架复合

全文目录

中文摘要  5-8
英文摘要  8-12
符号说明  12-13
前言  13-16
实验一骨髓间充质干细胞的分离、培养和向软骨细胞方向诱导分化的实验研究  16-22
实验二骨髓间充质干细胞复合PLGA支架的体外培养研究  22-24
实验三 PLGA支架两端分别复合向软骨细胞方向分化的MSCs和未分化的MSCs修复犬骨软骨缺损的实验研究  24-29
讨论  29-41
结论  41-42
附图  42-53
参考文献  53-59
致谢  59-60
攻读学位期间发表的论文  60-61
学位论文评阅及答辩情况表  61

体内构建骨软骨复合体修复骨软骨缺损的实验研究

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