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胶体金免疫层析试纸条用于旋毛虫病诊断及检疫的研究

作　者: 秦银霞
导　师: 崔晶；王中全
学　校: 郑州大学
专　业: 病原生物学
关键词: 旋毛虫 胶体金 免疫层析法 旋毛虫镜检查法 消化法 血清 肉汁
分类号: R446.6
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要


旋毛虫病（trichinellosis）是由旋毛虫（Trichinella spiralis）引起的一种严重的人兽共患寄生虫病。旋毛虫寄生的宿主范围广泛，可感染人及其他150多种动物。目前全世界大约有1100万人体感染者，1995-1997年国际旋毛虫病委员会报道1万多例病人，现已被列入再度肆虐的疾病（re-emerging disease）。本病不仅对人类的健康构成严重威胁，而且给养猪业和和肉类出口也造成重大的经济损失。国内外学者对旋毛虫病的免疫诊断方法进行了大量研究，已建立的旋毛虫病检测方法有间接荧光抗体试验、酶联免疫吸附试验等，但操作较复杂且需一定的仪器设备，在推广应用方面受到了一定的限制。因此，建立一种快速简便、特异敏感的旋毛虫病检测方法，不仅可用于人及动物旋毛虫病的血清学诊断及流行病学调查，也可用于肉类及肉制品中旋毛虫的检疫，是目前旋毛虫病防治工作中亟待解决的问题之一。 本研究以胶体金标葡萄球菌蛋白A（SPA）和旋毛虫肌幼虫排泄分泌（excretory-secretory，ES）抗原建立了免疫层析试纸条，用于检测样本中的旋毛虫抗体。由于SPA可与人及多种动物IgG的Fc段相结合，故该试纸条不仅可用于人旋毛虫病的血清学诊断，也可用于多种动物旋毛虫病的检测。 材料与方法 1．制备旋毛虫ES抗原：将旋毛虫肌幼虫在1640培养基中于5％CO2培养箱中培养18～20h，收集上清，透析和冷冻干燥后得到纯化ES抗原；测蛋白浓度后—80℃保存。 2．胶体金标记SPA：用枸橼酸三钠（Na3C6H5·7H2O）还原氯金酸（HAuCl4），制备颗粒直径为15nm的胶体金溶液，冷却至室温后，以0.2 mol／L的K2CO3溶液调节其pH值至6.0，4℃保存。测定胶体金的最适SPA标记量，制备胶体金标SPA，用玻璃纤维吸附标记物并冷冻干燥，密封保存于4℃。 3．胶体金免疫层析试纸条制备：用PBS将ES抗原和人IgG均稀释至2mg／mL，在

全文目录


摘要  3-6
Abstract  6-13
1 前言  13-15
  1.1 旋毛虫病的危害及流行现状  13
  1.2 旋毛虫病诊断及肉类检疫中存在的问题  13-14
  1.3 胶体金免疫层析法的基本原理  14-15
  1.4 研究目的、内容和意义  15
2 材料和方法  15-24
  2.1 主要试剂  15-16
  2.2 主要仪器  16
  2.3 试验动物  16
  2.4 旋毛虫虫株  16
  2.5 试验血清及肉汁  16-17
  2.6 特殊材料  17
  2.7 试剂的配置  17-19
  2.8 旋毛虫肌幼虫ES抗原的制备  19-20
  2.9 免疫胶体金的制备  20-22
  2.10 GICA试纸条的制作  22
  2.11 ES抗原和金-SPA最佳组合浓度选择  22-23
  2.12 ES抗原和人 IgG最适浓度的搭配  23
  2.13 试纸条质量的考核  23
  2.14 样本的检测  23-24
  2.15 镜检法  24
  2.16 人工消化法  24
  2.17 酶联免疫吸附试验(ELISA)  24
  2.18 统计学处理  24
3 结果  24-38
  3.1 胶体金免疫层析试纸条的制备  24-28
  3.2 GICA试纸条检测结果保存时间的观察  28
  3.3 GICA试纸条对不同血清及肉汁样本的检测  28-34
  3.4 不同批次GICA试纸条的检测结果  34
  3.5 GICA试纸条与镜检法检测结果的比较  34-37
  3.6 GICA试纸条对低剂量旋毛虫感染小鼠血清的检测结果  37
  3.7 对其它种旋毛虫感染小鼠血清的检测  37
  3.8 GICA试纸条与 ELISA检测结果的比较  37-38
4 讨论  38-47
  4.1 ES抗原在旋毛虫病诊断中的应用  38-39
  4.2 免疫胶体金的制备  39-42
  4.3 NCM的包被  42-43
  4.4 NCM的封闭  43
  4.5 试纸条的组装  43-44
  4.6 样本的检测  44-45
  4.7 对其它种旋毛虫感染小鼠血清的检测  45
  4.8 GICA试纸条与ELISA法比较  45-46
  4.9 GICA试纸条与旋毛虫镜检法及人工消化法的比较  46-47
5 结论  47
参考文献  47-52
综述  52-67
英文缩写词索引  67-68
致谢  68

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中图分类: > 医药、卫生 > 临床医学 > 诊断学 > 实验室诊断 > 免疫学检验
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