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嵌合抗CD44抗体Fab’片断在大肠杆菌中的表达

作　者: 王伟强
导　师: 韩忠朝
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 内科学
关键词: CD44 单克隆抗体 急性髓性白血病 VH VL 人抗鼠抗 体反应 嵌合抗CD44 Fab’
分类号: R733.71
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要


HI44a（IgG2a）是一种鼠源性抗CD44单克隆抗体，其结合位点位于CD44分子胞外区临近透明质酸结合位点处。我室的研究发现：（1）HI44a能够有效诱导急性髓性白血病M2-M5亚型细胞的分化及凋亡；（2）HI44a能够抑制白血病细胞系THP-1增殖，诱导其凋亡；（3）HI44a的作用可能是通过抑制癌基因及抗凋亡蛋白的表达，增强特定的分化诱导因子的表达，降低线粒体膜电位实现的。（4）CD44是急性髓性白血病诱导分化及凋亡治疗的一个有效靶点。但是，HI44a是鼠源性单克隆抗体，直接应用于临床会引起人体对鼠源性抗体的免疫反应（HAMA反应），这是鼠源性抗体应用于临床的主要障碍，而基因工程抗体较好地解决了这个问题。 因此，我们对抗CD44鼠源性单克隆HI44a进行了基因工程改造，利用PCR方法从抗CD44单链抗体（ScFv）表达载体PET-22b上扩增出抗CD44抗体轻链可变区基因（VL）、重链可变区基因（VH），然后分别将VH、VL基因重组到含人轻链恒定区CL和人重链恒定区CH1的载体pYZL和pYZH中，构建成扩增载体pYZLcd44和pYZHcd44，最后应用内切酶切分别从pYZLcd44和pYZHcd44中消化下CL-VL、CH1-VH，将它们连接入表达载体pYZF中，构建嵌合抗CD44 Fab’表达载体pYZFcd44，并在16c9菌中表达。大量发酵16c9菌，表达嵌合抗CD44Fab’蛋白。应用SDS-PAGE和Western blotting的方法确认嵌合抗CD44 Fab’蛋白有表达。从细菌周质腔中提取可溶性表达的蛋白，结果发现可溶性表达的抗CD44F ab’蛋白量非常微少，大部分为不可溶

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 造血器及淋巴系肿瘤 > 白血病 > 急性白血病
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