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电击方法免疫流感病毒DNA疫苗保护效果研究

作　者: 周玉
导　师: 陈则
学　校: 湖南师范大学
专　业: 微生物学
关键词: 流感病毒 DNA疫苗 双表达载体 血凝素 神经氨酸酶
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
下　载: 35次
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内容摘要


本论文由两部分组成:H5N1亚型血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)DNA疫苗对H5N1亚型禽流感病毒的保护效果研究;以pIRES为载体构建的双表达质粒抗不同亚型流感病毒攻击的交叉保护效果研究。 (一)H5N1高致病性禽流感病毒在1997年第一次突破种属障碍传给人类,至今仍在各大洲广泛存在,影响世界经济秩序并威胁人类生命安全,对此需预先接种疫苗进行有效防范。DNA疫苗是能诱导机体产生持久的体液免疫和细胞免疫应答的一种新型疫苗,HA和NA是流感病毒感染中发挥主要作用的包膜糖蛋白,HA和NA的DNA疫苗对抗流感感染具有良好的保护效果。本文将A/Chicken/Henan/12/2004(H5N1)禽流感病毒的DNA片段HA、NA克隆入pCAGGSP7载体,构建HA和NA DNA疫苗,电击法免疫6～8周龄BALB/c小鼠,免疫两次,间隔三周,加强免疫后一周,用致死剂量H5N1型病毒A/Chicken/Henan/12/2004(H5N1)的小鼠适应株感染小鼠。从小鼠存活率、肺部病毒滴度、抗体应答水平及体重丢失率等方面检测疫苗效果。实验结果表明HA和NA DNA疫苗能有效保护小鼠抵御H5N1亚型禽流感病毒的攻击;为与H5N1亚型HA和NA的DNA疫苗的免疫效果进行比较,本文同样采用H1N1亚型(A/PR/8/34)HA和NA的DNA疫苗,以相同方式免疫小鼠,在致死量同型病毒攻击后,也取得了有效的保护。

全文目录


摘要  3-5
ABSTRACT  5-7
目录  7-11
第一章 前言  11-26
  1.流感病毒的基本特征  11-16
    1.1 形态和结构  11-14
    1.2 基因组结构和功能  14-15
    1.3 临床特征和流行简况  15-16
  2.H5N1型高致病性禽流感病毒的特征  16-21
    2.1 H5N1的理化特性  16-18
    2.2 H5N1的遗传变异  18-19
    2.3 H5N1的流行及危害  19-21
  3.DNA疫苗概述  21-22
    3.1.DNA疫苗的产生及发展  21-22
    3.2.流感病毒DNA疫苗的研究进展  22
  4.多基因共表达载体的研究进展  22-26
    4.1 多基因共表达载体的种类  22-24
    4.2 IRES序列在共表达中的作用  24-26
第二章 H5N1 HA／NA DNA疫苗电穿孔导入法免疫小鼠抗禽流感病毒保护效果研究  26-61
  1.引言  26-27
  2.材料与方法  27-45
    2.1 材料  27-32
    2.2 方法  32-45
  3 实验结果  45-55
    3.1 H5N1型禽流感病毒(A／Chicken／Henan／12／2004)HA、NA DNA疫苗的构建  45-47
    3.2 H5N1型禽流感病毒(A／Chicken／Henan／12／2004)能适应BALB／c小鼠  47
    3.3 电击免疫H5N1 HA DNA或NA DNA疫苗能保护BALB／c小鼠抗5×LD_(50) H5N1型病毒的攻击。  47-50
    3.4 电击免疫H5N1 HA DNA或NA DNA能保护BALB／c小鼠抗40×LD_(50) H5N1型病毒的攻击  50-51
    3.5 电击免疫H1N1 HA DNA或NA DNA能保护BALB／c小鼠抗致死量H1N1型病毒(A／PR／8／34)的攻击  51-54
    3.6 电击免疫HA DNA、NA DNA免疫BALB／c小鼠后诱导产生的抗体滴度  54-55
  4 讨论  55-59
    4.1 禽流感H5N1病毒适应BALB／c小鼠  55-56
    4.2 电击免疫HA DNA、NA DNA保护BALB／c小鼠抵御致死量H5N1型病毒的攻击  56-58
    4.3 电击免疫HA DNA、NA DNA能保护BALB／c小鼠抵御致死量H1N1型病毒的攻击  58-59
  第二章结语  59-61
第三章 双表达DNA疫苗的构建及抗流感病毒交叉保护效果研究  61-85
  1.引言  61-62
  2.技术路线  62-63
    2.1 pN1-IRES-N2的构建及免疫  62-63
    2.2 pN2-IRES-N1的构建及免疫  63
  3.材料与方法  63-70
    3.1 材料  63-66
    3.2 方法  66-70
  4.结果  70-80
    4.1 pN1-IRES-N2质粒的构建  70
    4.2 pN1-IRES-N2对小鼠抗不同亚型流感病毒交叉保护效果研究  70-73
    4.3 pN1-IRES-N2诱导小鼠产生的抗NA抗体效价  73-74
    4.4 pN2-IRES-N1质粒的构建  74-75
    4.5 pN2-IRES-N1对小鼠抗不同亚型流感病毒交叉保护效果研究  75-78
    4.6 pN2-IRES-N1诱导小鼠产生的抗NA抗体效价  78-80
  5.讨论  80-84
  第三章结语  84-85
参考文献  85-95
缩写表  95-96
读研期间文章发表和录用情况  96-97
致谢  97-98
湖南师范大学学位论文原创性声明  98

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学免疫学
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