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筛选日本血吸虫童虫早期诊断抗原的研究

作　者: 刘湘
导　师: 何立
学　校: 武汉大学
专　业: 病原生物学
关键词: 日本血吸虫早期诊断抗原成虫可溶性抗原童虫可溶性抗原表位
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

目的采用十二烷基磺酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和酶联免疫印迹术（EITB）筛选日本血吸虫童虫早期诊断抗原分子。同时,利用噬菌体随机12肽库技术筛选日本血吸虫感染早期诊断抗原模拟表位,经动物实验评估其早期诊断价值,并观察其抗血吸虫感染的免疫保护效果。方法收集日本血吸虫童虫与成虫,制各可溶性抗原,进行SDS-PAGE电泳后,转印至硝酸纤维素膜上,分别与感染后10d、21d、42d及正常兔血清进行免疫应印渍试验,比较两者反应条带的差异性,筛选出能被早期感染血清所识别的抗原组分。用日本血吸虫感染后21d血清从噬菌体12肽库中经3轮筛选,有效地富集与早期感染兔血清有亲和力的噬菌体克隆。随机挑取11个单克隆分别纯化、扩增,随后采用ELISA检测方法,挑选出与早期感染兔血清有高亲和力的噬菌体克隆,经动物实验鉴定其对日本血吸虫感染的早期诊断效果。同时按1×10¹⁵pfu/次剂量,0-2-4W方案,皮下多点注射免疫小鼠,末次免疫4W后,每鼠经腹部皮肤攻击感染40±1条日本血吸虫尾蚴,感染42d后观察减虫率及减卵率。结果日本血吸虫童虫可溶性抗原（SSA）和成虫可溶性抗原（SAWA）经SDS-PAGE后显示:SSA出现的条带数多于SAWA,主要位于分子量大于97kDa的区域,其它区域条带数及各条带迁移率大致相同,为期共同抗原。将SSA和SAWA分别与感染前及感染后10d、21d、42d兔血清进行EITB试验结果显示:SSA和SAWA与感染前兔血清均未出现反应带;与SAWA相比较,SSA的早期反应抗原带较多较强,SSA共出现12条反应带,其中97kDa和47kDa抗原分子只能被感染后10d兔血清特异性识别,而不能被感染后21d、42d兔血清识别,140kDa、107kDa、87kDa、74kDa、67kDa、62kDa、44kDa、32kDa、26kDa、16kDa抗原分子均能被感染后10d、21d、42d兔血清识别,除32kDa和16kDa与感染21d兔血清反应较弱外,其他抗原分子的反应强度随感染天数逐渐增强;SAWA仅出现7条反应带,未显示140kDa、107kDa、97kDa、62kDa和

全文目录

一、中文摘要  4-6
二、英文摘要  6-10
三、引言  10-12
四、正文  12-36
  材料与方法  12-19
  结果  19-27
  讨论  27-32
  结论  32-33
  参考文献  33-36
五、综述  36-48
  正文  36-44
  参考文献  44-48
六、后记  48

筛选日本血吸虫童虫早期诊断抗原的研究

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