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PMS肝气逆证大鼠含药血清对体外原代培养大鼠大脑皮层神经元活力及5-HT1A受体影响

作 者: 王海苹
导 师: 张惠云
学 校: 山东中医药大学
专 业: 中药学
关键词: PMS肝气逆证 含药血清 神经元 5-HT1A受体
分类号: R271.115
类 型: 硕士论文
年 份: 2005年
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内容摘要


目的:观察经前期综合征(premenstrual syndrome,PMS)肝气逆证大鼠含药(WPD胶囊)血清对体外原代培养大鼠大脑皮层神经元活力及其5-羟色胺1A(5-HT1A)受体表达的影响,以探索WPD胶囊治疗PMS肝气逆证大鼠中枢作用机制。 方法:含药血清浓度测定及其制备采用反相高效液相(RP-HPLC)色谱法测定大鼠造模给药后不同时间点血清芍药苷浓度,根据含药血清浓度-时间曲线的峰值时间确定含药血清最佳取血时间并制备含药血清;体外原代培养大鼠大脑皮层神经元观察鉴别采用吉姆萨染色法与免疫荧光化学法;神经元活力及其5-HT1A受体表达分别采用溴化3-(4,5-二甲基噻唑)2-,5-二苯基四氮唑[3-(4,5-dimenthylthiazolyl)2,5-diphenyltetrezolium bromide,MTT]法及免疫荧光细胞化学法。 结果:与模型组相比,大剂量组神经元MTT值与5-HT1A受体表达量均增加,P<0.01;中剂量组神经元MTT值增加,P<0.05,5-HT1A受体表达量增加,P<0.01;小剂量组神经元MTT值与5-HT1A受体表达量也增加,但P<0.05。与正常组相比,模型组神经元MTT值降低,P<0.05,5-HT1A受体表达量降低,P>0.05。含药血清组间比较,神经元MTT值与5-HT1A受体表达量均呈现出剂量-效应关系。 结论:WPD胶囊能通过增强大鼠大脑皮层神经元活力及5-HT1A受体表达以纠正PMS肝气逆证大鼠5-HT1A受体降低趋势,可能是该药治疗PMS肝气逆证的中枢作用机制之一。

全文目录


引言  14-16
实验一 含药血清芍药苷浓度测定及其制备  16-27
  一、实验材料  16
    (一) 实验仪器  16
    (二) 药品与试剂  16
    (三) 实验动物  16
  二、实验方法  16-19
    (一) 含药血清芍药苷含量测定  16-18
      1.色谱条件  16-17
      2.标准液配制  17
      3.血清样品预处理方法  17
      4.芍药苷标准曲线制备  17
      5.日内、日间精密度测定  17
      6.回收率测定  17
      7.检测限测定  17
      8.血清样品制备方法  17-18
    (二) 含药血清制备  18-19
      1.造模方法  18
      2.分组与给药  18-19
  三、实验结果  19-23
    (一) HPLC色谱图  19
    (二) 标准曲线  19-20
    (三) 日内、日间精密度  20-21
    (四) 回收率  21-22
    (五) 检测限  22
    (六) 含药血清中芍药苷浓度随时间的变化  22-23
  四、讨论  23-27
    (一) RP-HPLC测定方法确定  23
    (二) 指标选择  23
    (三) 实验动物模型选择  23-24
    (四) 给药剂量确定  24-25
    (五) 取血方案确定  25
    (六) 血清处理  25-26
    (七) 含药血清芍药苷浓度随时间的变化  26-27
实验二 胚胎大鼠大脑皮层神经元体外原代培养  27-34
  一、实验材料  27
    (一) 实验仪器  27
    (二) 药物与试剂  27
    (三) 实验动物  27
  二、实验方法  27-29
    (一) 大鼠大脑皮层神经元培养  27-29
      1.培养方法  27-28
      2.吉姆萨染色观察神经元形态  28
      3.免疫荧光染色法鉴定神经元  28-29
  三、实验结果  29-30
    (一) 神经元形态学观察  29-30
    (二) MAP_2标记鉴别神经元  30
  四、讨论  30-34
    (一) 神经元鉴别方法  30-31
    (二) 影响大鼠脑皮层神经元体外原代培养因素  31-34
      1.大鼠胎龄  31
      2.胰蛋白酶消化  31-32
      3.神经元纯化  32
      4.培养条件  32-33
      5.杂质细胞干扰  33-34
实验三 含药血清对体外原代培养大鼠大脑皮层神经元活力及5-HT1A受体影响  34-42
  一、实验材料  34
    (一) 实验仪器  34
    (二) 药物与试剂  34
    (三) 实验动物  34
  二、实验方法  34-36
    (一) 胚胎大鼠大脑皮层神经元培养  34
    (二) 神经元活力测定  34-35
    (三) 免疫荧光细胞化学染色法测定神经元5-HT1A受体含量与分布  35-36
      1.改良免疫荧光染色法测定神经元5-HT1A受体含量  35-36
      2.碘化丙碇标记神经元细胞核  36
  三、实验结果  36-38
    (一) 神经元活力测定结果  36-37
    (二) 体外原代培养大鼠大脑皮层神经元5-HT1A受体的变化  37-38
      1.体外原代培养大鼠大脑皮层神经元5-HT1A受体分布  37
      2.体外原代培养大鼠大脑皮层神经元5-HT1A受体表达量影响  37-38
  四、讨论  38-42
    (一) 反应系中血清添加量  38-39
    (二) 含药血清对体外原代培养大鼠大脑皮层神经元活力影响  39
    (三) 含药血清对体外原代培养大鼠大脑皮层神经元5-HT1A受体表达影响  39-42
讨论  42-46
  一、肝主疏泄与情志调节  42-43
  二、WPD胶囊组方分析及治疗PMS肝气逆证依据  43-44
  三、问题与展望  44-46
结语  46-47
参考文献  47-53
综述  53-70
附录  70-75
致谢  75

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中医妇产科 > 妇科病 > 经病 > 月经前后诸症
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