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PMS肝气逆证大鼠脑区ERα和ERβ基因表达及药物的影响

作　者: 王华盛
导　师: 郭平
学　校: 山东中医药大学
专　业: 中西医结合基础
关键词: PMS 肝气逆证基因表达 ERα ERβ 经前平颗粒
分类号: R271.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：制备经前期综合征(premenstrual syndrome, PMS)肝气逆证大鼠模型；检测大鼠中枢不同脑区(下丘脑、边缘叶、额叶皮层和海马)ERα和ERβ 基因表达的变化和ERβ/ERα与经前期综合征(PMS)肝气逆及行为学变化的关系；探讨PMS肝气逆证发病的微观机制及中药复方制剂经前平颗粒的干预作用。方法：采用电笼刺激法制备PMS肝气逆证大鼠模型,以调肝方药经前平颗粒进行药物干预。采用细胞涂片法观察大鼠阴道细胞形态,确定动情周期：接收期与非接收期。旷场实验检测大鼠行为学变化。提取脑组织RNA和蛋白质,采用半定量RT-PCR法测定各ERα和ERβmRNA水平变化,采用蛋白质印迹技术(western blot, WB)法检测各脑区ERα与ERβ蛋白质水平变化。结果：与正常对照组大鼠相比,模型组大鼠旷场实验的水平得分、垂直得分及总分均显著减少；与模型组相比,给药组大鼠旷场水平得分、垂直得分及总分均显著增加。利用RT-PCR方法研究显示,与正常对照组大鼠相比,模型组大鼠下丘脑、边缘叶、皮层和海马组织ERα和ERβmRNA表达显著降低(P<0.05),调肝方药经前平颗粒干预可改变ERα和ERβmRNA表达水平降低的状态。蛋白印迹实验表明,与正常对照组大鼠相比,模型组大鼠额叶皮层、海马、下丘脑、边缘叶ERα和ERβ表达显著降低(P<0.01)；与模型组比较,给药组各脑区的ERα和ERβ表达水平不同程度的升高。结论：PMS肝气逆证模型大鼠四个脑区ERα和ERβ基因表达降低,提示PMS肝气逆证的发生可能与中枢ERα和ERβmRNA表达降低相关；中药经前平颗粒对该病证模型大鼠上述脑组织内ERα和ERβ基因表达量的调节,可能是该药治疗PMS肝气逆证的机制之一。

全文目录

提要  3-4
Abstract  4-8
引言  8-9
材料与方法  9-26
  1 实验材料  9-15
    1.1 药品与试剂  9
    1.2 实验仪器  9-10
    1.3 实验动物  10
    1.4 溶液配制  10-15
      1.4.1 存储液配制  10-11
      1.4.2 使用液配制  11-15
  2 方法  15-26
    2.1 PMS 肝气逆证大鼠模型制备  15-17
      2.1.1 受试大鼠筛选  15
      2.1.2 大鼠动情周期确定方法  15-16
      2.1.3 动情周期行为学评定方法  16
      2.1.4 分组及饲养  16
      2.1.5 PMS肝气逆证模型制备  16
      2.1.6 给药方法及给药剂量  16-17
      2.1.7 行为学测定  17
    2.2 雌激素受体基因表达的检测  17-26
      2.2.1 组织取材  17
      2.2.2 RT-PCR  17-20
      2.2.3 western blot  20-26
结果  26-35
  1 行为学测试结果  26-27
  2 中枢雌激素受体基因表达检测结果  27-35
    2.1 中枢雌激素受体mRNA水平测定结果  27-29
    2.2 中枢雌激素受体蛋白质水平测定结果  29-35
讨论  35-39
  1. PMS肝气逆证动物模型和动情期的选择及行为学改变  35-36
    1.1 动情周期的选择  35
    1.2 PMS肝气逆模型的制备及模型评价方法  35
    1.3 实验中中枢脑区的选择  35-36
  2. 雌激素受体基因表达的改变及其与PMS肝气逆证的关系  36-39
    2.1 雌激素受体两个亚型  36-37
    2.2 雌激素受体对5-HT影响  37-38
    2.3 ER与γ-氨基丁酸的关系  38-39
问题与展望  39-41
参考文献  41-46
综述  46-52
  参考文献  49-52
附录  52-53
致谢  53-54
论文著作  54-58
中文详细摘要  58-62

PMS肝气逆证大鼠脑区ERα和ERβ基因表达及药物的影响

内容摘要

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