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猪leptin长形受体mRNA在脑内的分布定位

作　者: 王红星
导　师: 雷治海
学　校: 南京农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 猪 leptin长形受体 mRNA 分布定位原位杂交
分类号: S828.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2002年
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内容摘要

1 猪 leptin长形受体(OB-Rb)目的基因的克隆及核酸探针的研制根据Genebank上登录的leptin长形受体(OB-Rb)mRNA基因全序列，在其保守区设计一对引物。用Trizole法从长白三元杂交猪的下丘脑提取总RNA，然后用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法进行cDNA扩增，获得一条长343bp的目的基因片段，运用T-A克隆方法，将此片段连接到pGEM-Easy T载体，通过蓝白斑筛选、酶切和序列测定等方法进行重组质粒鉴定。最后的测序结果表明，获得的目的基因片段与发表的序列100％同源。用ApaⅠ和Sac Ⅰ酶使测序正确的重组质粒完全线性化后，以体外转录法合成OB-Rb反义和正义cRNA核酸探针，用斑点杂交法检测探针的浓度。检测结果表明，探针的浓度达到100ng／μl，满足杂交要求。 2 猪下丘脑内OB-Rb mRNA的分布定位本实验用原位杂交法研究了5头2-3月龄长白母猪下丘脑OB-Rb mRNA的分布定位。研究结果表明，OB-Rb mRNA标记神经元主要分布于下丘脑的弓状核、腹内侧核、背内侧核、室旁核和室周核，在下丘脑外侧区也散在分布标记神经元。 3 猪大脑皮质、海马结构、梨状叶和杏仁核内OB-RbmRNA分布定位本实验用原位杂交法研究了10头长白三元杂交猪大脑皮质、海马结构、梨状叶和杏仁核内OB-RbmRNA的分布定位。研究结果表明，大脑皮质和梨状叶内的OB-Rb mRNA标记神经元主要分布于Ⅱ-Ⅵ层，分子层偶见标记神经元。海马结构内的OB-Rb mRNA标记神经元主要位于海马的锥体细胞层和齿状回的颗粒层，在海马的始层和齿状回的多形层偶见标记神经元，在海马的辐射层和腔隙层罕见标记细胞。在杏仁核内，OB-Rb mRNA标记神经元主要见于皮质内侧核，在基底外侧核和中央核也有少量标记神经元。 4 猪丘脑、小脑和延髓内OB-Rb mRNA的分布定位本实验用原位杂交法研究了5头长白三元杂交猪丘脑、小脑和延髓内OB-Rb mRNA的分布定位。结果表明，OB-Rb mRNA标记神经元在长白三元杂交猪丘脑、小脑和延髓内均有分布。在丘脑内，OB-Rb mRNA标记神经元几乎见于所有核团，在中线核群、丘脑室旁核和丘脑前核群内出现大量的QB－Rb mRNA标i己神经元，其余核团 OBRb mRNA标记神经元分布较少。在小脑，皮质三层中均有 OB－Rb mRNA标记神经元，以梨状神经元层和颗粒层分布密集。在延髓下橄榄核、孤束核、迷走神经副交感核和舌下神经核也有 OB．Rb mRNA标记神经元出现。本文研究结果进一步肯定了别人在人、，啮齿类和羊上的研究结果丫丰富了脑内OB－Rb m洲A基因表达的资料，弥补了猪卤不同核团内 OB－Rb mMA分布定位资料的空白，为研究leptin的生物学作用及其作用机理提供了形态学基础，同时也为进一步研究OB－Rb与其它神经肽的共存关系奠定了基础。

全文目录

中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
引言  9-10
第一部分文献综述  10-33
  第一章 leptin和leptin受体  10-20
    1 ob基因的发现  10-12
    2 ob基因的表达产物及其调控  12-14
      2．1 ob基因的表达产物leptin  12-13
      2．2 ob基因表达的调控  13-14
    3 leptin受体的研究进展  14-20
      3．1 OB-R基因的发现  14
      3．2 OB-R的结构  14-15
      3．3 OB-R的信号转导机制  15-16
      3．4 OB-R与瘦素抵抗  16-17
      3．5 OR-R基因表达的研究进展  17-20
  第二章 leptin和leptin的生物学作用  20-33
    1 leptin与能量平衡和体重调节  20-26
      1．1 与摄食有关的神经中枢  20-21
      1．2 leptin对摄食的调控  21-26
    2 leptin在生殖调控中的作用  26-29
      2．1 leptin对生殖活动的调控  26-27
      2．2 leptin调节动物生殖活动的机制  27-29
    3 leptin在生长中的作用  29
    4 leptin在免疫中的作用  29-31
      4．1 leptin在先天性免疫中的作用  30
      4．2 leptin在获得性免疫中的作用  30-31
    5 leptin的其它生物学作用  31-33
      5．1 leptin参与造血功能  31
      5．2 leptin对交感神经的作用  31
      5．3 leptin对骨骼的影响  31-33
第二部分实验研究  33-58
  第三章猪 leptin长形受体（OB-Rb）目的基因的克隆及核酸探针的研制  33-39
    1 材料与方法  33-36
    2 结果  36-37
    3 本章讨论  37-39
  第四章猪下丘脑内leptin长形受体mRNA的分布定位  39-45
    1 材料与方法  39-40
    2 结果  40-44
    3 本章讨论  44-45
  第五章猪大脑皮质、海马结构、梨状叶和杏仁核内leptin长形受体mRNA的分布定位  45-51
    1 材料与方法  45-46
    2 结果  46-49
    3 本章讨论  49-51
  第六章猪丘脑、小脑和延髓内leptin长形受体mRNA的分布定位  51-58
    1 材料与方法  51-52
    2 结果  52-56
    3 本章讨论  56-58
总体讨论  58-61
结论  61-62
参考文献  62-74
附录  74-82
  1 主要试剂配方  74-76
  2 常用实验方法  76-81
  3 重组质粒测序图谱  81-82
致谢  82-83
硕士期间正式发表或已接受的文章  83

猪leptin长形受体mRNA在脑内的分布定位

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