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结瘤因子诱导紫花苜蓿根毛变形过程中钙与微丝作用的初步研究

作　者: 王安兆
导　师: 武维华
学　校: 中国农业大学
专　业: 植物学
关键词: 紫花苜蓿根毛结瘤因子钙微丝骨架
分类号: S541.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
下　载: 122次
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内容摘要

结瘤因子在豆科植物与根瘤菌形成共生的过程中起着重要作用。根瘤菌分泌产生的结瘤因子在诱导豆科植物结瘤过程中可以引起豆科植物根毛的一系列变化。在没有根瘤菌的存在下,结瘤因子也可以独立引起根毛变形、皮层分裂和前侵染线的形成等根瘤形成的早期事件。本论文工作以紫花苜蓿(Medicago sativa)和中华苜蓿根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)为实验材料,利用结瘤因子诱导的根毛变形实验,探讨钙、微丝在根毛变形中的作用。本论文工作主要包括以下几个方面,首先进行了中华苜蓿根瘤菌分泌结瘤因子的分离、纯化工作,采用高效液相色谱纯化取得了中华根瘤菌分泌的结瘤因子。然后,观测了钙、微丝对结瘤因子诱导的紫花苜蓿根毛变形的影响,发现钙和微丝都参与了根毛变形过程。根毛外部一定浓度的钙是根毛变形所必需的,外部高浓度的钙可以引起类似于结瘤因子诱导的根毛变形。微丝解聚剂latrunculin A处理根毛后,可以抑制结瘤因子诱导的根毛变形。进一步的结果表明,钙在某种程度上可以缓解微丝解聚对根毛变形的抑制作用。此外,利用GFP-mtalin、DsRed-mtalin标记微丝,同时利用cameleon标记钙,构建了可以在紫花苜蓿根毛中双标微丝和钙的载体,为活体双标紫花苜蓿根毛内微丝和钙提供材料。

全文目录

摘要  5-6
ABSTRACT  6-7
英文缩写表  7-8
第一章文献综述  8-14
  1．1 钙与根毛顶端生长  8-9
  1．2 微丝骨架与根毛顶端生长  9-10
  1．3 结瘤因子与根毛  10-11
  1．4 结瘤因子与钙  11-12
  1．5 结瘤因子与微丝  12-13
  1．6 本论文工作拟解决的问题  13-14
第二章结瘤因子的提取  14-23
  2．1 引言  14
  2．2 材料和方法  14-16
    2．2．1 材料来源  14
    2．2．2 化学试剂  14
    2．2．3 苜蓿中华根瘤菌的培养  14-15
    2．2．4 生长曲线测定  15
    2．2．5 结瘤因子分离和纯化  15-16
    2．2．6 根毛变形实验  16
  2．3 实验结果与分析  16-21
    2．3．1 苜蓿中华根瘤菌生长曲线  16-17
    2．3．2 HPLC纯化结果  17-20
    2．3．3 HPLC纯化的结瘤因子活性检测  20-21
  2．4 讨论  21-23
    2．4．1 野生型菌株Sm83060和转基因菌株Sm1021(pEK327)色谱图比较  21-22
    2．4．2 转基因菌株Sm1021(pEK327)分泌的结瘤闪子活性检测  22-23
第三章钙、微丝对结瘤因子诱导的紫花苜蓿根毛变形的影响  23-30
  3．1 引言  23
  3．2 材料和方法  23-24
    3．2．1 试剂  23
    3．2．2 苜蓿中华根瘤菌结瘤因子的提取  23
    3．2．3 紫花苜蓿幼苗的培养  23
    3．2．4 钙与结瘤因子诱导的紫花苜蓿根毛变形关系实验  23-24
    3．2．5 LatA对紫花苜蓿根毛生长速度的影响  24
    3．2．6 微丝与结瘤因子诱导的紫花苜蓿根毛变形关系实验  24
    3．2．7 微丝和钙共同作用与结瘤因子诱导的苜蓿根毛变形实验关系实验  24
  3．3 结果与分析  24-29
    3．3．1 钙对结瘤因子诱导的紫花苜蓿根毛的影响  24-25
    3．3．2 LatA对紫花苜蓿根毛生长速度的影响  25-26
    3．3．3 微丝对结瘤因子诱导的紫花苜蓿根毛变形的影响  26-28
    3．3．4 钙、微丝在结瘤因子诱导的紫花苜蓿根毛变形中的相互作用  28-29
  3．4 讨论  29-30
第四章钙、微丝双标载体的构建以及紫花苜蓿的转化  30-41
  4．1 引言  30
  4．2 材料与方法  30-35
    4．2．1 菌株和质粒  30-31
    4．2．2 酶、试剂盒及主要化学试剂  31-32
    4．2．3 培养基配制  32-33
    4．2．4 溶液配制  33-34
    4．2．5 实验方法  34-35
  4．3 结果与分析  35-40
    4．3．1 根毛特异启动子LeEXTI的克隆  35-36
    4．3．2 载体LeEXTI：：GFP-mtalin和LeEXTl：：cameleon的构建  36-37
    4．3．3 双标载体LeEXTI：：GFP-mtalin+LeEXTl：：cameleon的构建  37-38
    4．3．4 红色荧光蛋白DsRed基因的克隆  38
    4．3．5 载体LeEXTl：：DsRed-mtalin的构建  38-39
    4．3．6 双标载体LeEXTl：：DsRed-mtalin+LeEXTI：：cameleon的构建  39
    4．3．7 紫花苜蓿的转化  39-40
  4．4 讨论  40-41
第五章结论与展望  41-42
  5．1 结论  41
  5．2 展望  41-42
参考文献  42-49
致谢  49

结瘤因子诱导紫花苜蓿根毛变形过程中钙与微丝作用的初步研究

内容摘要

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