学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

祛风清热、活血通络法对大鼠胶原诱导关节炎的作用机制研究

作　者: 代玉芳
导　师: 向阳
学　校: 湖北民族学院
专　业: 中医基础理论
关键词: 祛风清热、活血通络法胶原诱导大鼠关节炎民族草药滑膜细胞增殖炎症细胞因子
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 31次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

目的:确立祛风清热、活血通络法。制备Ⅱ型胶原诱导大鼠关节炎模型(CIA),评价金边祛风饮对CIA大鼠关节炎的治疗作用和对炎性细胞因子及金属蛋白酶水平的影响,探讨可能的作用机制,为金边祛风饮在临床上的应用提供实验依据。方法:(1)理论探讨祛风清热、活血通络法。(2)采取Wistar大鼠60只,建立大鼠胶原诱导的关节炎模型,随机分为6组,对CIA大灌服不同剂量金边祛风饮,观察其对大鼠关节炎指数、病理改变的影响,同时检测治疗前后CIA大鼠血清TNF-α、IL-1β、MMPs-3水平变化;培养CIA大鼠滑膜细胞,MTT法检测金边祛风饮对滑膜细胞增殖的影响,流式细胞仪测定滑膜细胞凋亡,观察金边祛风饮对培养的CIA大鼠滑膜细胞和TNF-α、IL-1β、MMPs-3生成的影响。结果:(1)CIA模型结果:足内注射注射Ⅱ型胶原蛋白、弗氏不完全佐剂、乙酸混合物后18 h,左后足爪开始出现红、肿、热,持续3 d后逐渐减轻。10～14 d,出现以多发性关节炎为特征的全身迟发性变态反应,50只大鼠的四肢关节中98%出现不同程度的红肿,以左后肢为主,约占98%,前肢的肿胀占10%,炎症此起彼伏,迁延达2月余,部分出现关节畸形。另外,多数大鼠的耳和尾部出现炎性小结,内脏风湿结节明显。部分大鼠出现变应性角膜翳等关节外表现。(2)金边祛风饮对CIA的治疗效果:各组口服金边祛风饮后,大鼠关节疼痛指数均有所改善,以高、中剂量组明显,病程明显缩短(P<0.01),关节外表现较少、病变较轻。给药第2周时,各组关节肿胀指数均低于模型对照组,有显著性差异( P<0.05) ,给药第3周时,各组关节肿胀指数低于对照组,以高剂量组明显,与对照组均有显著性差异(P<0.01)。(3)CIA大鼠关节病理检查:病变关节软组织高度肿胀,滑膜炎症反应表现突出,具有衬里细胞层增厚,间质水肿并有大量以淋巴细胞为主的炎细胞浸润,有血管翳形成并侵袭软骨和软骨下骨组织造成骨和软骨的破坏。经药物治疗后关节滑膜病理检查,模型对照组:关节面腔隙内软组织可见大量的梭形成纤维细胞,组织稀疏、水肿,并见大量中性粒细胞和一些淋巴细胞、单核细胞浸润,毛细血管充血明显,并有红血球渗出。金边祛风饮中剂量组关节面上皮细胞多呈梭形,上皮下可见到少量单核细胞和淋巴细胞浸润,纤维细胞轻度增生,毛细血管有增生和充血,部分可见到浆细胞浸润。正常对照组:组织和细胞排列规则,无明显炎症反应。金边祛风饮能减轻大鼠关节皮下软组织及滑膜组织的充血和水肿程度,抑制滑膜细胞的增生,缓解炎性细胞的浸润,表明金边祛风饮在缓解CIA关节炎症方面疗效确切,值得做进一步的研究。(4)金边祛风饮治疗28天后,血清、细胞上清液TNF-α、IL-1β、MMPs-3水平均降低,以高、中剂量最明显(P<0.05)。各剂量金边祛风饮均有抑制滑膜细胞生长的趋势(P<0.05),诱导滑膜细胞凋亡(P<0.05),以高剂量明显(P<0.01),细胞上清液中TNF-α、IL-1β、MMPs-3水平均亦明显降低(P<0.01)。各病变关节从大体上观察均恢复至造摸前。结论:以祛风清热、活血通络立法指导而组成的金边祛风饮治疗大鼠CIA有效,本方能减轻关节滑膜的炎症,其治疗机制与调节炎症细胞分泌炎性因子IL-1β、TNF-α和调控MMPs-3表达及抑制滑膜细胞增殖、诱导滑膜细胞凋亡有关,为金边祛风饮治疗类风关提供了一定的理论依据。

全文目录

摘要  3-5
Abstract  5-7
缩略词表  7-9
前言  9-10
理论探讨  10-14
  1 祛风清热、活血通络法治疗痹证的理论基础  10-12
    1.1 病因病机  10
    1.2 辨证分型  10-11
    1.3 治疗原则  11-12
  2 金边祛风饮治疗RA的组方依据与方药配伍探析  12-14
实验研究  14-28
  1 实验材料  14-16
    1.1 研究对象  14
    1.2 主要试剂、药物与仪器  14-16
  2 实验方法  16-19
    2.1 CIA大鼠模型的建立  16
    2.2 CIA大鼠关节炎肿胀的测定  16
    2.4 ELISA法测定IL-1β、TNF-ɑ、MMPs-3  16-17
    2.5 CIA大鼠膝关节滑膜组织的采集  17
    2.6 MTT法测定  17-18
    2.7 流式细胞仪检测  18-19
    2.8 统计学处理  19
  3 结果  19-25
    3.1 一般情况  19
    3.2 CIA模型评价  19-20
    3.3 金边祛风饮对CIA大鼠关节肿胀指数的影响  20-21
    3.4 金边祛风饮对血清IL-1β、TNF-α、MMPs-3 的影响  21
    3.5 金边祛风饮对细胞培养液上清液中IL-1β、TNF-ɑ、MMPs-3 的影响  21
    3.6 滑膜细胞培养结果  21-22
    3.7 金边祛风对CIA大鼠滑膜细胞增殖的影响  22-23
    3.8 膝关节组织学观察  23-24
    3.9 滑膜细胞培养与刺激结果  24-25
  4 讨论  25-28
结论  28-29
参考文献  29-32
综述  32-36
  参考文献  35-36
附录  36-37
硕士期间发表论文  37-38
致谢  38

祛风清热、活血通络法对大鼠胶原诱导关节炎的作用机制研究

内容摘要

全文目录

相似论文