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CDK11~(p58)在施万细胞炎症应激中的表达及其意义的研究

作　者: 何兴新
导　师: 段义农
学　校: 南通大学
专　业: 病原生物学
关键词: 炎症 脂多糖 CDK11p58 Cyclin D3 施万细胞 MAPK通路
分类号: R363
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的研究CDK11p58及其相关细胞周期蛋白Cyclin D3在大鼠施万细胞株RSC96炎症状况下的表达情况,探讨它们对施万细胞生物学行为的影响。方法1、培养大鼠施万细胞株RSC96,构建施万细胞炎症模型。在细胞水平,运用Western blot技术检测炎症状况下施万细胞的增殖和凋亡变化;2、运用RT-PCR、Western blot、免疫荧光、免疫共沉淀、核浆分离等技术,检测LPS对CDK11p58和Cyclin D3表达、相互作用、亚细胞定位的影响;3、运用Cyclin D3干扰片段和HA-p58过表达质粒转染到RSC96细胞株中,检测其对CDK11p58定位以及对细胞增殖和凋亡的影响;4、运用丝裂原激活蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）抑制剂探讨其对LPS诱导CDK11p58表达的信号通路的作用。结果1、在LPS诱导大鼠施万细胞株炎症模型建立中,我们观察到细胞增殖指标PCNA和活化的caspase-3片段表达与LPS的剂量和刺激时间呈相关。2、大鼠施万细胞株RSC96受LPS刺激后,CDK11p58和Cyclin D3表达以时间和剂量依赖的方式调节。正常的施万细胞中,CDK11p58和Cyclin D3在细胞核和细胞浆中都有表达。在予LPS刺激后CDK11p58和Cyclin D3主要定位在核中,并且两者有明显共定位。运用免疫共沉淀研究表明,CDK11p58和cyclin D3能够在施万细胞中相互作用,并且定位于细胞核内,并且炎症进程可以加强这一过程。3、在RSC96细胞转染HA-P58过表达质粒后,发现可以明显抑制SCs的增殖,并引起细胞的凋亡。在转染Cyclin D3干扰片段后,可以减缓CDK11p58入核,减弱细胞凋亡过程。4、分别运用MAPK通路的细胞外信号调节激酶（ extracellular signal-regulated kinase, P44/42）的抑制剂U0126、P38抑制剂SB202190、应激活化蛋白激酶/Jun氨基末端激酶（stress activated protein kinase/Jun N-terminal kinase,SAPK/JNK）抑制剂SP600125分别处理施万细胞显示,抑制ERK1/2的活性后P58表达和激酶活性无变化。而抑制SAPK/JNK的活性可以显著抑制LPS诱导的CDK11p58的表达上调和激酶活性的增加,而抑制P38后则对p58的表达无明显影响。转染HA-p58质粒后,可以明显抑制BCL-2在施万细胞上的表达,LPS可以增强HA-p58质粒对BCL-2表达的抑制作用。而JNK通路抑制剂SP可以明显抑制LPS诱导的p58表达,从而对BCL-2表达的起到促进作用。结论1、正常状态下,CDK11p58和Cyclin D3在施万细胞中核浆均有表达。LPS炎性应激后两分子反应性表达增高,并且主要定位于施万细胞的胞核中,提示该分子作为一种炎症反应蛋白,参与神经系统早期的炎症反应。2、转染HA-p58质粒能够抑制PCNA表达,促进caspase-3活化,说明CDK11p58参与抑制施万细胞的增殖和促进凋亡。转染cyclin D3 siRNA质粒能够抑制p58入核、抑制caspase-3活化,说明cyclin D3能够调节p58表达,影响其激酶活性。3、LPS以时间和剂量依赖的方式诱导CDK11p58和Cyclin D3在施万细胞表达,并抑制BCL-2表达致细胞凋亡,其主要依赖LPS可诱导的MAPK通路中SAPK/JNK通路的激活。

全文目录


摘要  5-7
Abstract  7-10
第一章 绪论  10-15
  1.1 研究的目的和意义  10-12
  1.2 国内外研究概况  12-15
    1.2.1 国外研究概况  12-13
    1.2.2 国内研究概况  13-15
第二章 CDK11~(P58)在LPS 诱导的施万细胞增殖抑制和细胞凋亡中的作用及机制  15-36
  第一节 序言  15
  第二节 材料和方法  15-25
  第三节 结果  25-31
  第四节 讨论  31-32
  第五节 结论  32-33
  参考文献  33-36
第三章 LPS 致炎施万细胞中MAPK 信号通路的相关研究  36-50
  第一节 序言  36-37
  第二节 材料和方法  37-40
  第三节 结果  40-45
  第四节 讨论  45-47
  第五节 结论  47-48
  参考文献  48-50
英文缩写词表  50-51
综述  51-66
  参考文献  59-66
在攻读硕士学位期间公开发表的论文与参加的项目  66-67
  A：在国内外刊物上发表的论文  66-67
致谢  67

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 病理学 > 病理生理学
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