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CHD1L在肝脏发育过程中的动态表达及意义

作　者: 徐丽萍
导　师: 马宁芳
学　校: 广州医学院
专　业: 人体解剖与组织胚胎学
关键词: 胎肝 CHD1L CD34 胎盘绒毛 肝癌
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


研究背景与目的CHD1L(Chromodomain Helicase/Adenosine Triphosphatase DNA Binding Protein 1-Like)是近年新发现的肝癌特异性表达基因,在正常肝组织内不表达,其编码的蛋白质有SNF家族的特征性结构,具备SNF蛋白家族的转录调控、染色质重构、调节蛋白-DNA结合等功能的分子结构基础,但其确切作用及机制目前所知甚少。肿瘤形成与胚胎发育在增殖、分化、基因表达等方面极为相似,提示胚胎发育与肿瘤发生有内在的联系。胚胎肝脏是研究肝干细胞增殖分化的一个极佳模型,中胚层起源的造血干细胞、间充质细胞和内胚层起源的上皮细胞在胎肝微环境中共同发育成熟,在此过程中CHD1L基因是否表达、其表达定位特点等国内外尚未见相关报道,而CHD1L表达规律及定位特点对于阐明CHD1L与肝癌发生的关系有重要意义,本文对此展开研究。方法本研究采用RT-PCR方法、Western blot方法及免疫组织化学、免疫荧光双标记方法,从mRNA水平及蛋白质水平研究小鼠胎肝发育过程中CHD1L的表达及演变规律;并在人胎肝、胎盘及肝癌组织中对其表达进行验证,同时确定表达细胞类别。结果1、小鼠胎肝内CHD1L表达:E12.5开始小鼠胎肝内出现微弱的CHD1L mRNA表达,E13.5-E15.5表达达峰值,E16.5之后表达逐步减弱,至E18.5表达消失,CHD1L表达随Albumin表达增强而逐渐减弱并消失。免疫组化结果显示E13.5-E15.5胎鼠肝内有明显的CHD1L阳性表达细胞,分别定位于肝细胞索内、血窦内造血细胞及血窦内皮的胞核,其中以血窦内造血细胞及内皮细胞的表达占多数。E15.5之后未见明显的CHD1L阳性表达细胞。在7wk-8wk人胚肝内有明显的CHD1L阳性表达细胞,散在于肝细胞索及肝血窦腔内,22wk-24wk胎肝则未见CHD1L表达。2、人胎盘绒毛组织中CHD1L表达及细胞鉴定:妊娠早期(6wk-8wk)人胎盘绒毛组织中有较强的CHD1L mRNA及蛋白表达,妊娠中期(20wk-24wk)绒毛组织中CHD1L表达水平明显下降。免疫荧光双标结果显示绒毛组织血管腔内、血管内皮及绒毛间充质组织内可见散在CHD1L~+ /CD34-及CHD1L~+ /C D34~+两种阳性标记细胞。3、肝癌组织内CHD1L表达及细胞鉴定:癌巢细胞有CHD1L阳性表达,癌巢周围结缔组织内尚可见卵圆形或长杆状的CHD1L阳性胞核,散在分布。CHD1L与CD34免疫荧光双标记显示癌巢内细胞为CHD1L~+ /CD34~-,癌巢周围结缔组织内有CHD1L~+/CD34~-及CHD1L~+/CD34~+两种细胞。结论1、小鼠胎肝发育过程中有CHD1L动态表达,表达峰値时间为E13.5- E15.5,随胎肝细胞分化成熟CHD1L表达消失,提示CHD1L表达与肝细胞发育分化密切相关。2、CHD1L表达于中胚层来源的造血干细胞、胚胎性内皮细胞及间充质细胞。3、肝癌组织内的CHD1L~+细胞可能来源于胚胎时期沉默于肝脏局部的干细胞。

全文目录


缩略词表  3-4
中文摘要  4-6
英文摘要  6-9
前言  9-11
材料与方法  11-24
实验结果  24-28
讨论  28-33
结论  33-34
参考文献  34-38
附图  38-43
综述  43-49
  参考文献  46-49
附录  49-50
致谢  50-51

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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