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禽副粘病毒Ⅰ型鸽源分离株融合蛋白基因克隆、测序及致病性的研究

作　者: 郁斌
导　师: 王永坤
学　校: 扬州大学
专　业: 禽病学
关键词: 禽副粘病毒I型鸽源分离株 F基因反转录PCR 核苷酸与氨基酸同源性基因VI型NDV 致病性
分类号: S852.65
类　型: 硕士论文
年　份: 2001年
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内容摘要

利用RT-PCR技术，分别从禽Ⅰ型副粘病毒（APMV-Ⅰ）鸽源分离株（PPMV-Ⅰ）SZb9803株、NC9701株、NP9904株、PK9910株四株中成功扩增出预期大小为约0.5Kb的F基因重要功能区片段；从PPMV-IS Za9803株、YZ9712株、PB9601株三株中分别成功扩增出大小为1.7Kb的F基因，与预期的片段大小相一致，然后进一步将上述四株PPMV-Ⅰ的F基因重要功能区片段和三株PPMV-Ⅰ的F基因分别克隆入pGEM~R-T质粒载体中，进而对所克隆人的片段分别进行鉴定和序列测定及分析。应用Clustal W软件将上述所得序列与从Genebank和其它文献资料中获取的NDV基因Ⅱ、Ⅲ、Ⅵ、Ⅶ型代表株F基因1-389间的核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行同源性分析。结果表明：SZa9803株、SZb9803株、YZ9712株、NC9701株、NP9904株、PB9601株六株PPMV-Ⅰ分离株与新城疫病毒（NDV）广东肇庆鸽源分离株ZQ98-1株的核苷酸、氨基酸同源性分别为：96％-97％、96％-98％，与属于NDV基因Ⅵ型b亚型的英格兰参考株1168/84株、威尔士参考株760/83株的核苷酸、氨基酸同源性分别为：93％-95％、91％-94％；与基因Ⅱ型代表株Lasota株的核苷酸、氨基酸同源性分别为：82％-83％、85％-87％；与基因Ⅲ型代表株F48E8株的核苷酸、氨基酸同源性分别为：84％-85％，85％-87％；与基因Ⅶ型代表株YG97分离株的核苷酸、氨基酸同源性分别为88％-89％、89％-91％。应用PHYLIP软件绘制基因进化树，由进化树可见，SZa9803株、SZb9803株、YZ9712株、NC9701株、NP9904株、PB9601株六株PPMV-Ⅰ分离株均属于NDV基因Ⅵ型的b亚型，且形成一个独立的进化簇。而PK9910株则属于NDV基因Ⅱ型，依据评价NDV致病性的三个致病指数（最小致死量致死鸡胚平均死亡时间（MDT）、一日龄SPF雏鸡脑内接种致病指数（ICPI）、六周龄SPF雏鸡静脉接种致病指数（IVPI）），我们对五株鸽源分离株的MDT、ICPI、IVPI三个指数分别进行了测定，其结果分别为MDT 87.6-88.8小时，ICPI 1.38-1.53，IVPI 1.00-1.50。为了能够更准确地评价这五株PPMV-Ⅰ分离株对鸽的致病性，我们根据在鸡体上测定IVPⅠ的方法，在五周龄非免疫鸽体上进行了这五株PPMV-Ⅰ分离株的IVPⅠ测定，其结果为：1.78-2.07。而PK9910分离株对鸡和鸽的IVPI值均为0。试验结果表明：SZa9803株、YZ9712株、NC9701株、PB9601株四个鸽源分离株均属于中速型NDV毒株，而对鸽则呈强致病性，相当于速发型NDV毒株。而PK9910分离株属缓发型NDV毒株。禽副粘病毒I型鸽源分离株融合蛋白基因克隆、测序及致病性的研究2 交叉血凝抑制（HI）试验比较PPW－I分离株与Lasota株结果表明：SZa9803株、SZb9803株、YZ9712株、NC9701株、PB9601株虽与Lasota株有很高的血清交叉反应，对同源血清（抗 SZa9803株血清）的 HI为 1：2’，而与异源血清（抗Lasota株血清）的HI为 1：2’，而PK9910株与抗Lasota株血清的HI为 1：2’，比其它五株叩W－I分离株与抗 Lasota株血清的 HI滴度（1：2‘）高，但己表现出这五株PPMV－I分离株与Lasota株有差异。

全文目录

中文摘要  3-5
英文摘要  5-7
前言  7-10
材料与方法  10-16
结果  16-27
讨论  27-32
参考文献  32-36
附录  36-42
致谢  42

禽副粘病毒Ⅰ型鸽源分离株融合蛋白基因克隆、测序及致病性的研究

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