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大豆疫霉根腐病抗病基因的RAPD标记研究

作　者: 曲娟娟
导　师: 李景鹏
学　校: 东北农业大学
专　业: 微生物与免疫学
关键词: 大豆疫霉根腐病 近等基因系 抗病基因 RAPD分析
分类号: S565.103.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2001年
下　载: 155次
引　用: 2次
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内容摘要


大豆疫霉根腐病是一种毁灭性的大豆土传病害，由Phytophthora sojae引起。1991年首次在我国黑龙江省发现该病害，此后，该病害呈逐年扩大趋势，对黑龙江省大豆生产构成严重威胁。本文以大豆抗疫霉根腐病2对近等基因系（Williams与Williams79、Williams与Williams82）为材料，从大豆叶片中提取DNA，对近等基因系基因组DNA进行RAPD分析，结果显示：经160个10-核苷酸随机引物对2对近等基因系基因组DNA的扩增，有3个引物（OPN-05、OPA-02和OPQ-04）在Williams79中各扩增出1-2条特异带，有4个引物（OPF-16、OPB-05、OPD-06和OPH-05）在Williams82中各扩增出了1-2条特异带，在轮回亲本（Williams）中未见有上述的片段被扩增，多次重复OPQ-04、OPH-05均获得较一致的结果。当以这两个随机引物对4个已知含Rpsl-c、3个已知含Rpsl-k的抗病材料和2个不含Rpsl-c、Rpsl-k基因的感病材料进行检测时，它们分别在抗病材料中出现而在感病材料中均未出现。因此，推测这些特异性条带（DNA片段）分别与大豆抗疫霉根腐病抗性基因Rpsl-c、Rpsl-k连锁，得到显性RAPD标记OPQ-04700、OPH-05?。

全文目录


中文摘要  5-6
英文摘要  6-7
1 前言  7-17
  1．1 文献综述  7-16
    1．1．1 大豆疫霉根腐病研究概况  7-11
      1．1．1．1 病害的起源与发展  7-8
      1．1．1．2 病原菌形态及生物学特性  8
      1．1．1．3 病原菌的生理小种  8-9
      1．1．1．4 病原菌引起的病害症状及致病机制  9
      1．1．1．5 病原菌的检测  9
      1．1．1．6 抗病机制研究  9-10
      1．1．1．7 抗病基因研究  10-11
    1．1．2 分子标记在植物抗病基因定位中的应用  11-13
      1．1．2．1 DNA与DNA分子标记的特点  11-12
      1．1．2．2 主要的分子标记及其分析技术  12-13
    1．1．3 与抗病基因连锁的分子标记在育种中的应用  13-14
      1．1．3．1 标记辅助的基因累加  13-14
      1．1．3．2 标记辅助选择的基因克隆利用  14
    1．1．4 RAPD技术原理及其在大豆抗病基因定位中的应用  14-16
      1．1．4．1 利用近等基因系进行基因定位  15
      1．1．4．2 利用分离群体制作的近等基因池进行基因定位  15-16
    1．1．5 小结  16
  1．2 课题研究的目的和意义  16-17
2 病原菌的分离及供试植株的抗感鉴定  17-24
  2．1 材料与方法  17-19
    2．1．1 培养基的制备  17
    2．1．2 土壤滤液的制备  17
    2．1．3 病原菌标本采集  17-18
    2．1．4 病原菌的分离  18
    2．1．5 供试植株的抗感鉴定  18-19
      2．1．5．1 病原菌的活化  18
      2．1．5．2 病原菌的扩繁  18
      2．1．5．3 病原菌的接种  18-19
  2．2 结果与分析  19-23
    2．2．1 病原菌的鉴定  19
    2．2．2 病原菌分离方法对比  19-20
    2．2．3 供试植株抗感鉴定  20-23
  2．3 讨论  23-24
3 大豆抗疫霉根腐病近等基因系的RAPD分析  24-33
  3．1 材料与方法  24-28
    3．1．1 试验材料及仪器  24-26
      3．1．1．1 试验材料  24
      3．1．1．2 主要试剂及配制  24
      3．1．1．3 随机引物及序列  24-26
    3．1．2 试验操作  26-28
      3．1．2．1 基因组DNA的提取  26-27
      3．1．2．2 DNA浓度和质量的检测  27
      3．1．2．3 PCR扩增  27
      3．1．2．4 引物的筛选  27
      3．1．2．5 RAPD产物的电泳检测  27-28
  3．2 结果和分析  28-30
    3．2．1 大豆全DNA的提取  28
    3．2．2 近等基因系基因组DNA的RAPD分析  28-29
    3．2．3 多态性引物对Rps1-c、Rps1-k基因的检测  29-30
  3．3 讨论  30-33
    3．3．1 RAPD的扩增效率  30-31
    3．3．2 DNA的提取  31
    3．3．3 PCR反应程序  31-32
    3．3．4 RAPD的稳定性  32-33
4 结论  33-34
参考文献  34-38
致谢  38

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中图分类: > 农业科学 > 农作物 > 经济作物 > 油料作物 > 大豆
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