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肉苁蓉的内生真菌分离鉴定及其种子萌发条件的初步研究

作　者: 周峰
导　师: 陈君
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 生药学
关键词: 肉苁蓉内生真菌鉴定生态分布种子萌发
分类号: S567.239
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

肉苁蓉(Cistanche deserticola Y.C.Ma)为列当科肉苁蓉属多年生专性寄生草本植物,寄生于藜科梭梭属多年生小乔木梭梭[Haloxylon ammodendron(C.A.Mey.)Bunge]的根部.是我国传统名贵中药材,素有"沙漠人参"之称.内生真菌在植物体内广泛存在,在宿主植物的生长发育和系统演化过程中起重要的作用。目前,关于肉苁蓉属植物内生真菌的系统研究在国内外仍是空白。本研究以肉苁蓉为对象,对不同地区、不同季节、不同大小的肉苁蓉不同部位内生真菌进行分离,并运用传统形态学和现代分子生物学方法进行鉴定,探明肉苁蓉植物中内生真菌的组成、生态分布及多样性。同时,对肉苁蓉种子萌发条件进行了研究。研究结果对筛选高效活性内生菌菌株、揭示肉苁蓉与内生真菌的互作关系、研究内生真菌及对肉苁蓉种子萌发、产量及品质的影响具有重要意义,主要创新成果和结论如下：1.对肉苁蓉内生真菌进行了系统的分离和鉴定,从2393个肉苁蓉植物组织块中分离到618株内生真菌,其中产孢菌种453株,鉴定归属到22个属,不产孢的菌株有165株。2.研究了肉苁蓉内生真菌的生态分布,从2393个组织块中获得长菌组织块570个,分离出内生真菌菌株618株,总定殖率为23.8%,总分离率为25.8%。明确了肉苁蓉内生真菌的种类、数量存在部位、地区、季节差异,茎下表内生真菌定殖率和分离率显著高于其他部位,从花和种子中分离的内生真菌最少；宁夏永宁和内蒙磴口两个样地内生真菌的定殖率和分离率没有显著性差异,但宁夏永宁的内生真菌种类和数量比内蒙磴口丰富；秋季样品较春季样品展现出更丰富的内生真菌种类以及更高的定殖率和分离率；不同生长年限的样品无显著性差异。3.对不产孢及部分产孢肉苁蓉内生真菌进行分子鉴定,成功测序26株不产孢菌株,其中4株鉴定后归属于4个种；14株归属于7个属；6株归属于2个科；1株鉴定到目,1株鉴定到纲；分子鉴定结果表明26株产孢菌株有20株与形态鉴定结果一致,其中12株归属于9个种；8株归属于6个属。4.系统研究了预培养对肉苁蓉种子萌发的影响,结果表明,预培养液种类、浓度对肉苁蓉种子萌发的影响极显著,预培养时间、温度及pH则对种子萌发的影响不显著。研究发现不同年份肉苁蓉种子萌发率显著不同,通过对种子形态性状和萌发率的相关性分析发现萌发率和种仁千粒重有一定的正相关关系,种仁千粒重为0.030g-0.039g的肉苁蓉种子萌发率最高。5.以未层积的肉苁蓉种子为材料,研究了去种皮、萌发刺激物、生长调节物质的种类及浓度、pH、消毒方式等对肉苁蓉种子萌发的影响,结果表明,去掉种皮后肉苁蓉种子萌发率显著提高；GA3能显著性提高肉苁蓉种子的萌发率且不同浓度GA3对肉苁蓉种子的萌发有显著影响；pH 7.0是肉苁蓉种子萌发最适宜环境；采用NaClO处理5 min表面消毒效果较好。

全文目录

摘要  7-9
Abstract  9-11
引言  11-13
第一章论文综述  13-40
  第一节内生真菌研究概述  13-27
    1 内生真菌的概念及研究历史  13-14
    2 内生真菌的多样性  14
    3 内生真菌生态学  14-16
      3.1 内生真菌生态类群  14
      3.2 内生真菌的分布  14-16
    4 内生真菌的生物学意义  16-19
      4.1 促生长作用  16-17
      4.2 增加宿主对环境胁迫的抗性  17
      4.3 活性次生代谢产物  17-19
    5 内生真菌的分离鉴定  19-21
      5.1 植物组织的表面消毒  19-20
      5.2 培养基的选择  20
      5.3 内生真菌的鉴定  20-21
    6 展望  21-22
    参考文献  22-27
  第二节根寄生植物种子萌发的研究进展  27-40
    前言  27
    1 根寄生植物种子的萌发特性  27-29
      1.1 种子具胚后熟的休眠特性  27-28
      1.2 种子的预培养  28-29
      1.3 种子萌发刺激物的诱导与"自杀性萌发(suicidal germination)"  29
    2 根寄生植物种子的萌发刺激物及其调节机制  29-31
      2.1 刺激根寄生植物种子萌发的信号物质  29-30
      2.2 萌发刺激物的调节机制  30-31
    3 根寄生植物种子萌发刺激物的生物合成途径  31-32
    4 根寄生植物种子识别萌发刺激物的分子机制  32-33
    5 展望  33-35
    参考文献  35-40
第二章肉苁蓉内生真菌的分离及形态鉴定  40-106
  前言  40-41
  1 材料  41-43
  2 方法  43-44
  3 结果  44-103
    3.1 内生真菌形态鉴定结果  44-46
    3.2 内生真菌形态特征描述  46-103
  4 小结与讨论  103-104
  参考文献  104-106
第三章肉苁蓉内生真菌的生态分布  106-120
  前言  106
  1 材料和方法  106-107
  2 数据分析  107
  3 结果  107-116
    3.1 内生真菌的分离率和定殖  107-109
    3.2 肉苁蓉不同部位内生真菌的定殖率和分离率  109-110
    3.3 不同地区肉苁蓉内生真菌的定殖率和分离率  110-111
    3.4 不同季节肉苁蓉内生真菌的定殖率和分离率  111-112
    3.5 不同生长年限肉苁蓉内生真菌的定殖率及分离率  112-113
    3.6 肉苁蓉内生真菌的组成  113-116
  4 小结与讨论  116-118
  参考文献  118-120
第四章肉苁蓉内生真菌的分子鉴定  120-139
  前言  120-121
  1 材料与方法  121-122
  2 系统发育分析  122-133
    2.1 不产孢菌株的系统发育分析  122-128
    2.2 产孢菌株的系统发育分析  128-133
  3 结果与分析  133-135
    3.1 测序结果  133
    3.2 不产孢菌株的鉴定  133-134
    3.3 产孢菌株的鉴定  134-135
  4 小结与讨论  135-138
  参考文献  138-139
第五章预培养对肉苁蓉种子萌发的影响  139-154
  前言  139
  1 材料  139-140
  2 方法  140-142
  3 结果与分析  142-151
    3.1 预培养液及预培养时间对种子萌发的影响  142-144
    3.2 生长调节物质及预培养温度对种子萌发的影响  144-145
    3.3 不同浓度GA_3处理不同时间对种子萌发的影响  145-147
    3.4 pH对种子萌发的影响  147
    3.5 不同年份种子萌发的差异性  147-151
  4 小结与讨论  151-152
  参考文献  152-154
第六章肉苁蓉种子萌发培养条件研究  154-167
  前言  154
  1 材料  154
  2 方法  154-156
  3 结果与分析  156-163
    3.1 去皮对种子萌发的影响  156
    3.2 无预培养对种子萌发的影响  156-157
    3.3 不同浓度生长调节剂对种子萌发的影响  157-159
    3.4 氟啶酮对种子萌发的影响  159
    3.5 GA_3与FL交互作用对种子萌发的影响  159-161
    3.6 pH对种子萌发的影响  161-162
    3.7 消毒方式对种子萌发的影响  162
    3.8 不同种子萌发的差异性  162-163
  4 小结与讨论  163-165
  参考文献  165-167
主要结论  167-171
致谢  171-172
作者简介  172
研究生期间己发表或录用论文及成果目录  172-173

肉苁蓉的内生真菌分离鉴定及其种子萌发条件的初步研究

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