学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

间充质干细胞株C3H10移植治疗小鼠实验性变态反应性脑脊髓炎的研究

作　者: 刘柳
导　师: 张学光
学　校: 苏州大学
专　业: 免疫学
关键词: 实验性变态反应性脑脊髓炎间充质干细胞移植
分类号: R512.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 19次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

目的及意义:实验性变态反应性(自身免疫性)脑脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE)是一种由活化T细胞介导的器官特异性自身免疫性疾病,主要病理特征为血管周围炎性细胞浸润和中枢神经脱髓鞘反应,在临床症状、生化指标及病理等方面与多发性硬化(Multiple Sclerosis, MS)具有相似的特征,因此EAE被认为是研究MS的良好动物模型。目前,国内外学者多用易感动物建立EAE模型,用以阐明MS及EAE的发病机制,并为其检测病情、预防复发、合理治疗方案的选择以及新方法、新药物的筛选等提供可靠的实验依据,为此建立稳定可靠的EAE动物模型是为今后开展EAE系列研究的基础。已有研究发现在EAE早期将脂肪来源的间充质干细胞经静脉输注动物模型体内,可以减轻脊髓炎症和脱髓鞘改变,并在淋巴器官和中枢神经系统能够检测到该成体干细胞(adult stem cells, ASCs),但确切的作用及机制尚未探讨。随着对间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)免疫学特性的深入研究,相信在不久的将来MSCs在自身免疫性疾病(autoimmune disease, AID)的领域中将会得到广泛应用。本研究旨在观察鼠源性间充质干细胞株C3H10移植对EAE小鼠模型疾病进程的影响,为研究MS等AID的治疗提供实验基础。方法:第一部分:24只C57BL /6J雌性10周龄小鼠随机分成三组,即未干预对照组、C3H10细胞移植组(前两组为实验组)和正常对照组。实验组用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein, MOG35-55)加完全弗氏佐剂(complete freund adjuvant, CFA)制备抗原佐剂乳化物于腋下皮下单点单次注射免疫小鼠,分别在免疫当天和24小时后尾静脉注射百日咳毒素(bordetella pertussis vaccine, BPV),对照组皮下和尾静脉注射PBS,在免疫第八天通过尾静脉注射羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester, CFSE)染色后的C3H10细胞至细胞移植组小鼠体内。观察三组动物发病的临床表现,按照国际通用的五分制评分法连续进行神经功能分级评分并结合持续35天的体重测量,于免疫后第12-24天取症状明显的未干预对照组小鼠和C3H10细胞移植组、正常对照组小鼠的脊髓进行冰冻切片行HE染色、Luxol Fast-blue髓鞘染色观察小鼠脑和脊髓的病理学改变,从而鉴定EAE模型是否成功,C3H10细胞移植组小鼠是否在体征表现、脊髓的病理学改变等方面呈现明显的治疗作用。第二部分:采用新鲜脊髓组织冰冻切片的方法处理C3H10细胞移植组小鼠,在荧光显微镜下寻找C3H10细胞并观察其是否成功进入脊髓组织。结果:(1)动物行为学的改变:免疫后第十天开始,未干预对照组小鼠陆续出现EAE临床症状,第14-18天达到发病高峰,平均神经功能评分为2±0.53(p<0.05);C3H10细胞移植组小鼠有一只第14天和第18天评分为1分,正常对照组小鼠一直未出现临床症状(0分),持续观察35天。(2)体重变化:未干预对照组小鼠体重呈逐渐下降趋势,第14天体重约18.93±2.12g,第22天体重约18.65±2.04g;C3H10细胞移植组小鼠体重有上升趋势,于免疫后第14天测体重为18.7±0.93g,免疫后第22天小鼠体重保持在19.26±0.58g,两组相比有统计学差异(P<0.01)。(3)病理学改变:未干预对照组小鼠脑和脊髓小血管周围炎细胞浸润,呈袖套状或脱髓鞘改变,而C3H10细胞移植组和正常对照组小鼠未出现明显的脑和脊髓小血管炎症的病理变化。(4)显微镜下观察:在C3H10细胞移植组小鼠的脊髓组织中观察到有C3H10细胞形态的荧光出现。结论:(1)本实验建立的小鼠模型在体征表现、病理变化等方面符合复发-非缓解型EAE的表现,模型稳定、可靠,是研究MS的理想动物模型。(2)小鼠间充质干细胞株C3H10移植于EAE小鼠可明显减少并延缓EAE发病,呈现明显的治疗作用。

间充质干细胞株C3H10移植治疗小鼠实验性变态反应性脑脊髓炎的研究

内容摘要

全文目录

相似论文