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抗生素对腹膜间皮细胞的影响的观察

作　者: 曾真
导　师: 张怡玲
学　校: 大连医科大学
专　业: 老年医学
关键词: 腹膜间皮细胞腹膜纤维化抗生素 TGF-β1
分类号: R965
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：通过观察抗生素对体外培养的人腹膜间皮细胞的增殖情况、细胞产生细胞因子转化生长因子-β1 (Transforming Growth Factor-β1, TGF—β1)、及细胞超微形态结构的影响,探讨通过腹腔内给药的方式使用抗生素与腹膜纤维化之间的关系。方法：从持续不卧床腹膜透析(Continuous Ambulatory Peritoneal Dialysis, CAPD)患者透出液中提取腹膜间皮细胞进行原代培养,培养的细胞经过生长形态观察、免疫组化、电镜超微结构的观察鉴定,确定为间皮细胞,细胞传代后分别加入不同浓度的头孢拉定、头孢曲松和左氧氟沙星三种抗生素,并设置无药对照组,分别培养12h和24h,用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法测定细胞增殖情况,用酶联免疫吸附实验(Elisa)法测定细胞上清中TGF—β1的含量,用透射电镜观察细胞结构。结果：从CAPD患者透出液中分离出的细胞经过培养,倒置相差显微镜观察结果示：细胞呈多形性,多为梭形,细胞生长融合时呈铺路石样改变。免疫组化结果示：鼠抗人角蛋白抗体、鼠抗人波形蛋白抗体为阳性胞浆表达：兔抗人Ⅷ因子抗体、鼠抗人白细胞CD45抗体为阴性表达。扫描电镜结果：放大30k倍后见细胞表面丰富的微绒毛。透射电镜：细胞表面丰富的微绒毛,胞浆内可见丰富的内质网和囊泡,放大12K倍的细胞可见表面微绒毛,细胞内细胞器丰富完整。加入抗生素培养细胞24小时后透射电镜观察见：细胞器肿胀,结构不清,少许空泡样结构,甚至出现细胞凋亡。MTT结果：左氧氟沙星组：与对照组比较,12小时和24小时均在药物浓度为40mg/L及以上时吸光光度值明显减少,具有统计学意义(p<0.01)。头孢拉定组：与对照组比较,12小时药物浓度为100mg/L及以上时吸光光度值减少具有统计学意义(p<0.01)；而24小时,当药物浓度为10mg/L及以上吸光光度值减少具有统计学意义(p<0.01)。头孢曲松组：与对照组比较,12小时药物浓度为1000mg/L及以上时吸光光度值减少具有统计学意义(p<0.01)；而24小时,当药物浓度为10mg/L及以上时即可见吸光光度值减少具有统计学意义(p<0.01)。TGF—β1含量测定结果：左氧氟沙星组：12小时,药物浓度为80mg/L及以上时,上清液中TGF—β1的量较对照组增多,有明显统计学差异(p<0.01)；24小时,当药物浓度为40mg/L及以上时,上清液中TGF—β1的量较对照组增多,具有统计学差异(p<0.01)。头孢拉定组：12小时和24小时均为药物浓度100mg/L及以上时,上清液中TGF—β1的量较对照组明显增多,有统计学差异(p<0.01)。头孢曲松组：12小时和24小时均为药物浓度为100mg/L及以上时,上清液中TGF—β1的量较对照组明显增多,有统计学差异(p<0.01)。结论：从CAPD患者腹膜透析透出液中分离出间皮细胞进行培养的方法是一种简便而有效的方法,电镜可从超微结构上直接观察细胞表面形态和内部结构,十分清晰简单。左氧氟沙星、头孢拉定、头孢曲松三种药物可抑制间皮细胞的生长增殖,促进间皮细胞分泌TGF—β1,因而具有促腹膜纤维化的作用。左氧氟沙星、头孢拉定、头孢曲松三种药物比较来看,左氧氟沙星促腹膜纤维化的作用相对较小,加之使用前无需皮试,较为简便,在居家腹膜透析患者合并腹膜炎的治疗时具有一定优越性。

全文目录

一、摘要  5-9
  (一) 中文摘要  5-7
  (二) 英文摘要  7-9
二、文献综述  9-18
  (一) 综述  9-15
  (二) 参考文献  15-18
三、正文  18-39
  (一) 前言  18-19
  (二) 材料与方法  19-22
  (三) 结果  22-31
  (四) 讨论  31-37
  (五) 结论  37-38
  (六) 参考文献  38-39
四、致谢  39-41

抗生素对腹膜间皮细胞的影响的观察

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