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化学污染地区产抗生素的稀有放线菌分离筛选

作　者: 邓晶
导　师: 吴文君
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 植保资源利用
关键词: 土壤放线菌抑菌活性筛选放线菌素Z4
分类号: S482.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 86次
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内容摘要

本文以淀粉酪素培养基为分离培养基,采用选择性分离的方法,对采自山东半岛化工厂、化肥厂和农药厂的10个土样进行放线菌的分离,共得到519株放线菌。主要研究结果如下:以金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)两种细菌为供试菌,采用管碟法测定了519株放线菌发酵液的抑制细菌活性,共筛选出134(25.82%)株具有抑制细菌活性的放线菌菌株。分别有100株和97株放线菌对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)有抑菌活性。以常见的植物病原真菌为供试菌,在离体条件下采用抑制菌丝生长速率法测定了519株放线菌发酵液的抗真菌活性。生测结果表明:共53(10.21%)株放线菌对病原真菌有抑制作用。其中,分别有25、26、26、31和36株放线菌对发酵液西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp. niveum)、茄子黄萎病菌(Verticillium dahliae)、苹果炭疽病菌(Colletotrichum gloesporioides)、辣椒疫霉病菌(Phytophthora capsici Leonian)和番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)有抑菌活性。通过抑制孢子萌发试验和盆栽试验结果表明,3D2-83、3D3-7、5D3-2、2D2-13、11B2-3、325、307和278八株放线菌对供试病原真菌都有较强的抑制作用。其中在抑制孢子萌发试验中3D2-83和2D2-13这两株放线菌发酵液的EC50值分别为36.73 mL·L-1和19.55 mL·L-1;在盆栽试验中,3D2-83发酵液都达到80%以上,而3D3-7发酵液对黄瓜霜霉病的保护作用也达到90%以上;对TMV侵染的活体治疗作用的试验中,5D3-2和278有一定的治疗活性。采用传统分类学方法对3D2-83、3D3-7、5D3-2、2D2-13、11B2-3、325、307和278这8株放线菌进行了初步分类。初步判断,这八株菌属于链霉菌属的不同类群的近缘种或变种。对放线菌3D3-7的发酵液进行初步研究,筛选出有利于菌株3D3-7产生活性物质的发酵培养基⑹;并最终分离得到一个具有抗细菌活性的化合物,该化合物通过ESI-MS,HR-TOF-MS,NMR等波谱学方法并查阅相关文献进行比对确定了活性化合物的结构为放线菌素Z4

全文目录

摘要  5-6
ABSTRACT  6-10
第一章文献综述  10-20
  1.1 不同生境中的稀有放线菌  10-13
    1.1.1 土壤中的稀有放线菌  10
    1.1.2 淡水中的稀有放线菌  10-11
    1.1.3 海洋中的稀有放线菌  11
    1.1.4 红树林中的稀有放线菌  11
    1.1.5 植物中的内生稀有放线菌  11-12
    1.1.6 极端环境中的稀有放线菌  12
    1.1.7 污染环境中的稀有放线菌  12-13
  1.2 稀有放线菌产生的生物活性物质  13-15
    1.2.1 小单孢菌属产生的生物活性物质  13
    1.2.2 诺卡菌属产生的生物活性物质  13-14
    1.2.3 马杜拉放线菌属产生的生物活性物质  14
    1.2.4 游动放线菌属产生的生物活性物质  14
    1.2.5 拟无枝菌酸菌属产生的生物活性物质  14-15
    1.2.6 小双孢菌属产生的生物活性物质  15
    1.2.7 糖多孢菌属产生的生物活性物质  15
    1.2.8 稀有放线菌属产生的其它生物活性物质  15
  1.3 稀有放线菌的选择性分离方法  15-18
    1.3.1 分离源的选择  15-16
    1.3.2 样品的预处理  16-17
    1.3.3 培养基的设计  17-18
  1.4 论文设计思路  18-20
第二章活性菌株分离及其筛选  20-31
  2.1 材料与方法  20-22
    2.1.1 材料与主要仪器  20-21
    2.1.2 实验方法  21-22
  2.2 结果与分析  22-29
    2.2.1 放线菌的分离  22-23
    2.2.2 放线菌生长速度结果  23
    2.2.3 放线菌活性筛选结果  23-29
  2.3 小结与讨论  29-31
第三章八株放线菌发酵液抑菌活性测定  31-34
  3.1 材料与方法  31
    3.1.1 材料  31
    3.1.2 方法  31
  3.2 结果与分析  31-32
    3.2.1 发酵液抑制番茄灰霉病菌孢子萌发的结果  31-32
    3.2.2 发酵液对盆栽黄瓜霜霉病和小麦白粉病的保护作用  32
    3.2.3 对TMV 侵染的活体治疗作用  32
  3.3 小结与讨论  32-34
第四章菌株的分类鉴定  34-44
  4.1 材料与方法  34
    4.1.1 供试菌株  34
    4.1.2 培养基  34
  4.2 方法  34-35
    4.2.1 菌株形态学特征  34
    4.2.2 培养特征观察  34
    4.2.3 生理生化特性测定  34-35
  4.3 结果与分析  35-41
    4.3.1 菌株的形态鉴定  35-36
    4.3.2 培养特征  36-40
    4.3.3 生理生化鉴定  40-41
  4.4 小结与讨论  41-44
第五章放线菌3D3-7 发酵液中活性成分的分离与鉴定  44-50
  5.1 材料与方法  44-45
    5.1.1 材料  44-45
    5.1.2 方法  45
  5.2 结果与分析  45-48
    5.2.1 发酵培养基的筛选  45-46
    5.2.2 吸附树脂的选择  46
    5.2.3 活性成分的提取分离  46-47
    5.2.4 活性化合物的结构鉴定  47-48
  5.3 小结与讨论  48-50
第六章结论  50-52
参考文献  52-57
附录1 抑制菌丝生长作用图片  57-60
附录2 盆栽试验图片  60-61
附录3 化合物图谱  61-64
致谢  64-65
作者简介  65-66
攻读硕士期间发表及拟发表论文  66

化学污染地区产抗生素的稀有放线菌分离筛选

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