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复合诱变亮白曲霉筛选高产乳糖酶菌株

作　者: 宋礼
导　师: 常城
学　校: 兰州大学
专　业: 动物学
关键词: 复合诱变亮白曲霉乳糖酶
分类号: TQ925
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

据估计,全世界70%的居民都有乳糖消化不良或乳糖不耐受现象。乳糖酶可以将牛奶中的乳糖水解成葡萄糖和半乳糖。利用乳糖酶来生产低乳糖乳制品,为减轻乳糖消化不良症状提供了一种可行的方法。用0.1mol／l的亚硝酸处理亮白曲霉孢子悬液,涂布平板。再用15瓦的紫外灯,15厘米垂直照射培养平板。通过初筛培养基筛选突变株。摇瓶发酵培养正突变株,离心得粗酶液。测酶活,对乳糖酶酶学性质做初步的探讨,采用超滤设备对粗酶液进行浓缩。通过实验,确定了亚硝酸处理亮白曲霉孢子悬液11分钟,紫外线处理5分钟。分离获得的乳糖酶酶活从原来的0.13U／g,提高到了1.1U／g。亮白曲霉乳糖酶的最适温度50℃,最适pH5.0,Mg2+促进乳糖酶活性,Cu2+抑制乳糖酶活性。超滤膜实现了酶液的纯化和浓缩,浓缩了19倍。本实验筛选到了一株比原始菌株乳糖酶产量提高8.5倍的突变株。

全文目录

中文摘要  6-7
Abstract  7-8
前言  8-13
  1 乳糖酶概述  8-9
  2 乳糖酶的应用  9-11
  3 乳糖酶研究方法进展  11
  4 本文的研究思路和目的  11-13
材料与方法  13-24
  1 实验材料  13-15
    1.1 实验菌株  13
    1.2 主要培养基  13-14
    1.3 主要试剂  14-15
    1.4 主要仪器设备  15
  2 方法  15-24
    2.1 亮白曲霉的复合诱变  15-16
    2.2 诱变剂量的确定  16-18
      2.2.1 亚硝酸诱变剂量的确定  16-17
      2.2.2 紫外线诱变剂量的确定  17-18
      2.2.3 复合诱变  18
    2.3 高产菌株的初筛  18-19
    2.4 高产菌株的复筛  19
    2.5 粗酶液的制备  19
    2.6 FCC分析法测乳糖酶酶活  19-22
      2.6.1 样品准备  19-20
      2.6.2 制备标准曲线  20-21
      2.6.3 计算r2和ε的线性关系  21
      2.6.4 乳糖酶活性的计算  21
      2.6.5 酶活测定步骤  21-22
    2.7 酶学性质的探讨  22
      2.7.1 测定酶最适反应温度  22
      2.7.2 测定酶最适反应pH  22
      2.7.3 测定金属离子对乳糖酶酶活的影响  22
    2.8 酶的超滤浓缩  22-24
结果与分析  24-31
  1.1 致死曲线的确定  24-26
  1.2 酶活结果  26-27
  1.3 酶学性质分析  27-30
    1.3.1 酶最适反应温度  27-28
    1.3.2 酶最适反应pH  28-29
    1.3.3 不同金属离子对酶活力的影响  29-30
  1.4 粗酶液的超滤浓缩  30-31
结论  31-32
展望  32-33
参考文献  33-39
致谢  39

复合诱变亮白曲霉筛选高产乳糖酶菌株

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