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非极性有机化学污染物致Vero细胞变形的机理初探

作　者: 贾入文
导　师: 徐殿胜；王磊
学　校: 华东理工大学
专　业: 生物化工
关键词: Vero细胞细胞变形流式细胞术质膜蛋白磷脂
分类号: X502
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

阐明Vero细胞在非极性有机污染物胁迫下的变形机理,并在此基础上建立一种定量表征细胞变形标志物的方法,将为建立基于Vero细胞变形的饮用水相关材料生物安全的定量评价方法提供理论依据和技术支撑。为此,本研究在考察了几种极性与非极性有机污染物对Vero细胞形态影响的基础上,采用流式细胞仪探索了非极性有机污染物胁迫下Vero细胞状态变化的可能原因,结果表明非极性有机污染物在导致细胞凋亡与坏死前,先致Vero细胞膜的损伤,细胞变形可能就是其宏观表现特征。然后又通过两相法提取Vero细胞质膜,当底物浓度为6.6%(W/W),盐浓度为10mmol.L-1时Vero细胞质膜的回收率可达70%左右,纯度较高。进一步的研究发现非极性有机污染物胁迫下的变形Vero细胞其质膜蛋白和磷脂占细胞干重的比例较正常细胞显著下降,且随污染物浓度增加而减少。这些结果初步表明磷脂、质膜蛋白含量和比例的变化可能导致细胞膜刚性结构的变化,进而导致细胞形态异常。因此检测有机污染物胁迫下细胞质膜蛋白与磷脂含量及其比例的变化将可能表征Vero细胞变形率。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-9
第1章引言  9-19
  1.1 饮用水及相关材料安全评价的研究进展  9-10
  1.2 哺乳动物细胞毒性法  10-11
  1.3 几种典型有机化学物的性质及其危害性  11-13
  1.4 哺乳动物细胞膜及其功能  13-17
  1.5 课题研究背景、内容与意义  17-19
    1.5.1 课题来源  17
    1.5.2 研究背景与意义  17
    1.5.3 研究目的和研究内容  17-19
第2章 Vero细胞培养  19-26
  2.1 前言  19
  2.2 材料与方法  19-22
    2.2.1 试剂与材料  19
    2.2.2 实验器材  19-20
    2.2.3 培养基的制备  20
    2.2.4 Vero细胞的传代培养  20-21
    2.2.5 Vero细胞的冻存和复苏  21-22
  2.3 实验结果  22-25
    2.3.1 不同接种密度对Vero细胞生长的影响  22-23
    2.3.2 不同传代消化时间对Vero细胞生长的影响  23-24
    2.3.3 其他实验条件的选择  24-25
  2.4 小结  25-26
第3章典型有机污染物对Vero细胞生长状态的影响  26-34
  3.1 前言  26
  3.2 材料和方法  26-28
    3.2.1 试剂与材料  26
    3.2.2 实验器材  26-27
    3.2.3 细胞培养和处理  27
    3.2.4 流式细胞仪ANNEXIN V-FITC/PI双染色分析法  27-28
  3.3 结果和讨论  28-33
    3.3.1 几种典型有机污染物对Vero细胞形态影响的比较  28-29
    3.3.2 TCP导致的Vero细胞凋亡与膜损伤  29-31
    3.3.3 Vero细胞膜损伤与凋亡分析  31-33
  3.4 小结  33-34
第4章 Vero细胞质膜的活性提取及其纯度鉴定  34-42
  4.1 前言  34
  4.2 材料和方法  34-38
    4.2.1 试剂与材料  34-35
    4.2.2 实验仪器  35
    4.2.3 细胞收集方法  35
    4.2.4 质膜的制备  35-36
    4.2.5 质膜标志酶活性测定  36-37
    4.2.6 磷酸盐浓度测定  37
    4.2.7 两相分配法分离质膜的条件选择  37-38
  4.3 结果与讨论  38-41
    4.3.1 两相分配液组分对Vero细胞质膜提取率的影响  38-39
    4.3.2 两相分配提取法所得细胞质膜纯度  39-41
  4.4 小结  41-42
第5章典型非极性有机化学物对Vero细胞质膜组分的影响  42-49
  5.1 前言  42
  5.2 材料与方法  42-44
    5.2.1 试剂与原料  42
    5.2.2 实验器材  42-43
    5.2.3 细胞膜蛋白含量测定  43
    5.2.4 磷脂含量测定  43-44
  5.3 结果与讨论  44-48
    5.3.1 TCP影响下正常与变形Vero细胞中质膜蛋白和磷脂含量的差异  44-45
    5.3.2 PFOS影响下正常与变形Vero细胞中质膜蛋白和磷脂含量的差异  45-47
    5.3.3 化学污染物导致Vero细胞质膜主要组分含量变化的原因分析  47-48
  5.4 小结  48-49
第6章结论和建议  49-51
  6.1 结论  49
  6.2 建议  49-51
参考文献  51-55
致谢  55-56

非极性有机化学污染物致Vero细胞变形的机理初探

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