学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

植病生防菌哈茨木霉（Trichoderma harzianum）的研究

作　者: 张衡宇
导　师: 吴刚；刘波
学　校: 福建农林大学
专　业: 微生物学
关键词: 哈茨木霉 生物学特性 绿色荧光蛋白 磷脂脂肪酸
分类号: S476
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 84次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


本文从台湾地区不同市县的13份土壤标本中分离到一株对镰刀菌有较强抑制作用的木霉生防菌,经鉴定为哈茨木霉,命名为FJAT-9040。本文研究了不同碳源、氮源、碳氮比、无机盐以及不同培养条件如培养时间、接种量、初始pH值、温度等对FJAT-9040菌丝生长和产孢量的影响,探讨了FJAT-9040菌丝生长及产孢与其菌体脂肪酸种类及含量的之间的相关性,测定了哈茨木霉菌株FJAT-9040对四株不同寄主的镰刀菌的抑制作用,构建了哈茨木霉的gfp基因遗传转化体系,成功获得了一个gfp基因标记的哈茨木霉菌株,命名为FJAT-9295,研究了该菌株在不同的土壤类型中的定殖特性及其对土壤微生物群落结构的影响,结果如下:FJAT-9040的最佳碳源为葡萄糖、最适氮源为牛肉浸膏,碳氮比以3:1为最好,最适无机盐为硫酸镁。经正交优化确定FJAT-9040的最适固体培养基组成合为:葡萄糖18 g、NaNO3 16.6 g、MnSO4 1 g、KH2PO4 2 g、水1000 mL。FJAT-9040的最佳培养条件为:培养3天最利于菌丝生长,4天产孢量最大,接种量以1%为最好;初始pH值为4-6时菌丝生长好,pH值为6-8时,产孢量最大;25℃为最适菌丝生长温度,最佳产孢温度为30℃。不同的营养条件能够引起哈茨木霉脂肪酸种类和含量的改变,但四种主要脂肪酸的含量均表现为:C18:2ω6,9c/18:0 ANTE > C16:0 > C18:1ω9c > C18:0。不同营养条件下的哈茨木霉经聚类分析聚成五个类群,结果表明不同类群的处理之间平均脂肪酸含量、种类、及主要脂肪酸的含量差异与哈茨木霉的菌丝生长及产孢情况具有一定的相关性。C18:2ω6,9c/18:0 ANTE脂肪酸的含量与菌丝生长和产孢密切相关。哈茨木霉菌株Trichoderma harzianum FJAT-9040对四株枯萎病病原菌FJAT-136、FJAT-141、FJAT-282、FJAT-370抑制率均在80%-90%之间。当镰刀菌孢子浓度为107个/mL时,抑菌圈直径分别为16.00 mm、27.9 mm、16.78 mm、14.54 mm。FJAT-9040的代谢液造成了镰刀菌菌丝发生扭曲、变细、原生质体膨大、浓缩、菌丝内出现大液泡等畸形。FJAT-9040的抑菌作用主要是通过竞争和抗生作用实现的。通过PEG-CaCl2介导的原生质体法构建了哈茨木霉的GFP转化体系,成功地将携带潮霉素B抗性基因和gfp标记基因的质粒pCT74整合到哈茨木霉的染色体上,获得一株荧光强度高,遗传稳定的转化菌株FJAT-9295,其菌丝生长的生物量和产孢量与野生型相比略有降低,抑菌能力略有降低,但抑菌效果仍显著。采用gfp基因标记的FJAT-9295哈茨木霉菌株研究了在不同土壤中的定殖特性,结果表明,哈茨木霉菌株FJAT-9295在不同类型的土壤中的定殖情况不同,定殖难易程度依次为沙土>营养土>黄土>菜园土。木霉定殖的前15天,在有植株的情况下定殖数量显著高于无植株的,16天后这种优势力逐渐降低,32天后趋于稳定,数量约为105个/mL。PLFAs分析结果表明:FJAT-9295能够明显地抑制土壤中细菌、真菌、放线菌等微生物的生长,从而改变土壤的微生物群落结构。

全文目录


中文摘要  8-9
Abstract  9-10
第一章 综述  10-18
  1 哈茨木霉在植物病害防治中的应用  10-11
  2 哈茨木霉生防机理的研究进展  11-12
    2.1 抗生作用  11
    2.2 竞争作用和重寄生作用  11-12
    2.3 诱导植物对病菌的抗性  12
  3 哈茨木霉的生物学研究  12-13
    3.1 营养条件  12-13
    3.2 培养条件  13
  4 哈茨木霉的脂肪酸生态学  13-14
  5 木霉的绿色荧光蛋白标记研究  14-15
    5.1 绿色荧光蛋白的研究  14
    5.2 木霉的绿色荧光蛋白标记和应用  14-15
  6 PLFA 法在微生物群落结构研究中的应用  15-16
  7 本论文的研究基础和研究意义  16-18
第二章 哈茨木霉的分离、筛选与鉴定  18-22
  引言  18
  1 材料与方法  18-19
    1.1 试验材料  18
    1.2 试验方法  18-19
  2 结果与分析  19-21
    2.1 土壤标本中木霉菌的分离  19
    2.2 枯萎病生防功能木霉菌初步筛选  19-20
    2.3 木霉菌的形态学及ITS 鉴定  20-21
  3 讨论  21-22
第三章 哈茨木霉的生物学特性  22-35
  引言  22
  1 材料与方法  22-24
    1.1 试验材料  22
    1.2 试验方法  22-24
  2 结果与分析  24-33
    2.1 不同营养对哈茨木霉FJAT-9040 菌丝生长和产孢量的影响  24-29
    2.2 培养时间对哈茨木霉FJAT-9040 菌丝生长和产孢的影响  29-30
    2.3 接种量对哈茨木霉FJAT-9040 菌丝生长和产孢的影响  30
    2.4 温度对哈茨木霉FJAT-9040 菌丝生长和产孢的影响  30-31
    2.5 初始pH 值对哈茨木霉FJAT-9040 菌丝生长和产孢的影响  31
    2.6 哈茨木霉FJAT-9040 最适抑菌条件研究  31-33
  3 讨论  33-35
第四章 哈茨木霉的脂肪酸生态学特性  35-47
  引言  35
  1 材料与方法  35-37
    1.1 试验材料  35
    1.2 试验方法  35-37
  2 结果与分析  37-46
    2.1 哈茨木霉脂肪酸特征指纹图谱构建  37-38
    2.2 营养条件对哈茨木霉菌脂肪酸的影响  38-41
    2.3 不同处理哈茨木霉脂肪酸生物标记的检测  41-43
    2.4 不同处理间哈茨木霉脂肪酸生物标记的分布特性分析  43-44
    2.5 不同处理脂肪酸生物标记多样性指数比较  44-46
  3 讨论  46-47
第五章 哈茨木霉对尖孢镰刀菌的抑制作用  47-53
  引言  47
  1 材料与方法  47-48
    1.1 试验材料  47
    1.2 试验方法  47-48
  2 结果与分析  48-51
    2.1 平板对峙法测定哈茨木霉FJAT-9040 对枯萎病病原菌的抑制效果  48-49
    2.2 抑菌圈法测定哈茨木霉FJAT-9040 对枯萎病病原菌的抑制效果  49-50
    2.3 显微镜下观察哈茨木霉FJAT-9040 对枯萎病病原菌菌丝生长的影响  50-51
  3 讨论  51-53
第六章 哈茨木霉的GFP 基因转导及转化子生物学特性  53-62
  引言  53
  1 材料与方法  53-56
    1.1 试验材料  53-54
    1.2 试验方法  54-56
  2 结果与分析  56-61
    2.1 哈茨木霉遗传转化体系的建立  56-58
    2.2 哈茨木霉转化子菌株FJAT-9295 与野生型菌株FJAT-9040 的生物学性质的比较  58-61
  3. 讨论  61-62
第七章 哈茨木霉在不同土壤中的定殖特性  62-66
  引言  62
  1 材料与方法  62
    1.1 试验材料  62
    1.2 试验方法  62
  2 结果与分析  62-64
    2.1 哈茨木霉转化子FJAT-9295 在不同类型土壤中的定殖  62-63
    2.2 哈茨木霉转化子FJAT-9295 在有无植株的土壤中定殖随时间变化情况  63-64
  3 讨论  64-66
第八章 哈茨木霉对土壤微生物群落结构影响  66-77
  引言  66
  1 材料与方法  66-67
    1.1 试验材料  66
    1.2 试验方法  66-67
  2 结果与分析  67-75
    2.1 FJAT-9295 对不同土壤中脂肪酸标记总量和种类的影响  67-68
    2.2 FJAT-9295 对不同土壤中的微生物群落的影响  68-75
  3 讨论  75-77
第九章 结论与展望  77-78
参考文献  78-84
致谢  84

相似论文

  1. 河南低致病性禽流感病毒（H9亚型）分离鉴定及生物学特性研究,S852.65
  2. 苏丹草叶斑病原平脐蠕孢菌的研究,S435.4
  3. 山羊骨髓间充质干细胞生物学特性、冷冻保存及基因转染研究,S827
  4. 三种水生植物生长对土壤性状和根际氮、磷耗竭的影响,S154.4
  5. 豆柄瘤蚜茧蜂田间动态及其生物学特性研究,S476.3
  6. Bacillus subtilis SQR9的黄瓜促生和枯萎病生防效果及其作用机制研究,S436.421
  7. ‘突尼斯软籽’石榴再生体系和GFP报告基因的瞬时表达研究初报,S665.4
  8. 禾谷镰刀菌致病相关基因的鉴定及其毒素DON特异亲和肽段的淘选,S432.4
  9. 金属硫蛋白基因工程菌的构建及其对重金属响应的研究,Q78
  10. 不同改良剂对土壤微生物生态的影响,S154.3
  11. 复混肥中缩二脲对作物毒害的临界值与缩二脲降解菌的研究,S143
  12. 白蜡吉丁啮小蜂生物学及耐寒性研究,S476.3
  13. 碳化二亚胺交联的脱细胞版纳近交系微型猪肌腱生物学特性研究,R687.2
  14. 西宁地区硅酸盐细菌生物学特性及促生效应的研究,S144
  15. 高山被孢霉产生花生四烯酸的研究,TQ921
  16. 菊花花色嵌合体生物学特性及形成机理的研究,S682.11
  17. 江浙地区八角科植物生物学特性及遗传多样性研究,S685.99
  18. 分枝杆菌同源膜锚定表达载体的构建与细胞定位分析,R378
  19. 血浆脂肪酸谱与2型糖尿病表型相关性研究：病例对照研究,R587.1
  20. 多选择标记植物表达载体的构建,Q943.2
  21. 生物炭对土壤微生物生态特征的影响,S154.3

中图分类: > 农业科学 > 植物保护 > 各种防治方法 > 生物防治
© 2012 www.xueweilunwen.com