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恒定及波动性高糖对内皮细胞膜弹性影响及机制的研究

作　者: 陈纤纤
导　师: 冯烈
学　校: 暨南大学
专　业: 内科学
关键词: 血管内皮细胞波动性高糖一氧化氮原子力显微镜细胞骨架肌动蛋白
分类号: R587
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

研究目的：探讨恒定性及波动性高糖状态对内皮细胞膜弹性的影响及其机制。研究方法人脐静脉血管内皮细胞体外培养,实验设8组：恒定性正常浓度葡萄糖组(即对照组,5mmol/L);恒定性高浓度葡萄糖组(25mmol/L);波动性高浓度葡萄糖组(25/5mmol/L);按eNOS抑制剂(L-NAME)不同浓度分为3组,分别为1mmol/L、5mmol/L和10mmol/L;为了模拟恒定性和波动性高浓度葡萄糖组渗透压的变化,通过加入D-甘露醇设立了恒定性高渗组和波动性高渗组。各组予以相应的培养液培养7天后进行检测。1.应用改良的硝酸还原酶法测定各组培养基中NO含量。2. Western-Blotting检测各组内皮细胞eNOS表达的情况。3.原子力显微镜对各组内皮细胞膜力学性能进行测量,得到各组内皮细胞膜的平均弹性及每组细胞外周及核周区域的膜平均弹性。4.荧光标记内皮细胞骨架肌动蛋白F-actin,通过共聚焦显微镜观察内皮细胞F-actin形态及含量的变化。研究结果1.与对照组相比,恒定性及波动性高糖组内皮细胞NO释放量、eNOS表达和细胞膜平均弹性显著下降,细胞膜外周区域较核周区域的硬度增加、弹性下降,F-actin含量明显高于对照组。除内皮细胞eNOS表达,两组间其余各项指标的比较均无统计学差异。2.随着培养基中L-NAME的浓度从1mM增加到10mM,其内皮细胞NO释放量、eNOS表达及细胞膜的弹性呈L-NAME浓度依赖性递减,细胞膜外周区域较核周区域的硬度增加、弹性下降。随着L-NAME的浓度增加,明显可见胞浆内单行排列F-actin丝组成的应力纤维逐渐增多、变粗,且F-actin含量也呈浓度依赖性递增。3.恒定及波动性高渗组不影响内皮细胞NO的释放,对细胞膜均无硬化作用,不存在不同区域间细胞膜平均弹性的差异。两组的F-actin含量与对照组相当,eNOS的表达较对照组降低。研究结论本实验发现恒定及波动性高糖状态导致血管内皮细胞膜的硬度增加,弹性下降,并提出了这种影响是通过内皮源性NO合成减少引起内皮细胞骨架肌动蛋白的重构所介导。

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-10
1 前言  10-20
  1 高糖状态对NO依赖的血管内皮功能的影响  10-13
  2 NO与内皮细胞骨架的关系  13-15
  3 原子力显微镜对血管内皮细胞的研究  15-20
2 材料与方法  20-36
  1 试剂与仪器  20-22
  2 配制的溶液  22-25
  3 研究方法  25-34
  4 统计学分析  34
  5 实验流程图  34-36
3 结果  36-44
  1 光镜下内皮细胞的形态  36
  2 内皮细胞的活性与增殖情况  36-37
  3 内皮细胞培养基中NO含量的检测结果  37-38
  4 不同培养基培养下内皮细胞eNOS表达的情况  38-39
  5 内皮细胞AFM成像及膜硬度测定的结果  39-42
  6 内皮细胞骨架肌动蛋白F-actin的形态及含量变化情况  42-44
4 讨论  44-53
  1 实验分组的设计  44-45
  2 内皮细胞活性与增殖  45
  3 不同的培养基对内皮源性NO含量的影响  45-46
  4 不同的培养基对内皮细胞eNOS表达的影响  46-48
  5 内皮细胞膜的弹性与内皮源性NO的关系  48-49
  6 不同培养基对内皮细胞骨架肌动蛋白形态及含量的影响  49-51
  7 内皮细胞骨架与膜弹性的关系  51
  8 实验存在的问题及展望  51-53
5 结论及研究的创新性  53-54
6 参考文献  54-59
7 英文缩略词表  59-61
8 彩图  61-64
9 发表论文  64-65
10 致谢  65

恒定及波动性高糖对内皮细胞膜弹性影响及机制的研究

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