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食品中纽甜和维生素B12的柱切换HPLC法测定研究

作　者: 赵凯
导　师: 王竹天；杨大进
学　校: 中国疾病预防控制中心
专　业: 营养与食品卫生学
关键词: 纽甜,维生素B12 柱切换,HPLC 保健食品婴幼儿配方食品
分类号: R151
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

本研究用两台高效液相色谱仪和一六通阀建立了一套在线柱切换HPLC系统,并将其应用于食品中纽甜和维生素B12的测定,研究内容分为两部分。第一部分:饮料、蜜饯、糕点中纽甜的柱切换HPLC法测定饮料、蜜饯和糕点中的纽甜用水超声提取后,置离心机中离心(5000转/min)5min,沉淀用20%甲醇溶液洗涤三次(糕点用50%甲醇洗涤),合并沉淀后的上清液经滤纸过滤后,过Waters HLB(6cc)固相萃取柱,以2ml 60%甲醇溶液洗涤、3ml甲醇洗脱。洗脱液经反相C18色谱柱-反相C18色谱柱(以乙腈、水和0.5%磷酸为流动相等度洗脱)分离,光电二极管阵列检测器测定纽甜的含量。以6种不同浓度的标准纽甜溶液进样获得的回归方程的回归系数为0.9999。同一样品处理液测定五次的结果计算获得的相对标准偏差为4.7%,处理液在1天内稳定,符合测定要求。方法的检出限为40μg/kg,样品三种加标水平的加标回收率结果均高于80%。本方法简便、结果可靠,可用于饮料和蜜饯和糕点食品中纽甜的测定。第二部分:保健食品和婴幼儿配方食品中维生素B12的柱切换HPLC法测定婴幼儿配方食品中的维生素B12有以添加的氰钴胺素和天然存在的甲基钴胺素等形式,需先统一转化为氰钴胺素进行测定。用0.1mol/L的乙酸钠缓冲溶液(pH4-5)提取(加入高峰淀粉酶和胃蛋白酶将淀粉和蛋白质水解释放结合型维生素B12),并在105℃下与氰化钾反应至少1小时,将其它类型的钴胺素转变为氰钴胺素。定容的提取液经Whatman 2V滤纸过滤后,过Alltech C8固相萃取柱,用5ml水和5ml 5%乙腈淋洗后用5ml 30%乙腈溶液洗脱,洗脱液氮吹干后定容至1ml。保健食品中的维生素B12用甲醇提取三次,合并提取液经水浴蒸干后用定容至5ml。处理后的试样经尺寸排阻柱预分离后,转入反相C18柱继续分离(乙腈/水作流动相梯度洗脱),经PDA检测器测定。由6种不同浓度的维生素B12标准溶液进样测定结果获得的标准曲线线性良好,回归系数为0.9996。由同一样品平行测定六份获得的重复性良好(RSD分别为4.7%和8.4%),各类样品三种不同浓度加标的加标回收率高于80%。与微生物法相比,本方法准确、检测时间短,可用于保健食品和婴幼儿配方食品中的维生素B12的测定。

全文目录

英文缩略语  7-8
文献综述  8-33
  1.柱切换HPLC在食品检验中的应用  8-20
    1.1 柱切换色谱技术  8-16
      1.1.1 柱切换色谱技术简介  8-10
      1.1.2 柱切换色谱模式  10-11
      1.1.3 待测组分的转移  11-13
      1.1.4 柱切换HPLC传递技术  13-16
    2.1 在食品检验中的应用  16-19
      2.1.1 农药残留检测  16
      2.1.2 兽药残留检测  16-17
      2.1.3 食品成分分析  17-18
      2.1.4 生物毒素检测  18
      2.1.5 其它应用  18-19
    3.1 存在缺陷及常用解决方法  19-20
      3.1.1 系统峰对色谱峰的干扰  19-20
      3.1.2 色谱峰展宽  20
  2.纽甜化学测定方法研究进展  20-21
  3.维生素B12化学测定方法研究进展  21-25
    3.1 分光光度法  21-22
    3.2 高效毛细管电泳法  22-23
    3.3 间接测定法  23
      3.3.1 原子吸收法  23
      3.3.2 显色反应法  23
      3.3.3 荧光分析法  23
    3.4 液相色谱法  23-24
    3.5 联用测定  24
    3.6 其它  24-25
  参考文献  25-33
摘要  33-35
ABSTRACT  35-37
绪论  37-39
  1.研究的意义  37-38
  2.研究内容  38-39
第一部分柱切换HPLC法测定饮料、蜜饯和糕点中纽甜的研究  39-61
  前言  39-40
  实验部分  40-61
    1.实验方法  40-45
      1.1 仪器与器材  40
      1.2 试剂  40-41
      1.3 分析步骤  41-44
        1.3.1 样品处理  41
        1.3.2 色谱条件  41-43
        1.3.3 标准溶液的配制  43-44
        1.3.4 流动相的配制  44
      1.4 计算  44
      1.5 标准溶液色谱图  44-45
    2.结果与讨论  45-60
      2.1 样品前处理  45-50
        2.1.1 样品提取  45-47
        2.1.2 沉淀剂的选择  47
        2.1.3 固相萃取  47-50
      2.2 HPLC条件的优化  50-57
        2.2.1 检测波长的选择  50-51
        2.2.2 色谱柱组合模式和色谱柱的选择  51-53
        2.2.3 色谱柱的平衡  53
        2.2.4 柱温的选择  53
        2.2.5 流动相的选择及优化  53-54
        2.2.6 流动相pH的选择  54-57
      2.3 方法的适用性研究  57-59
        2.3.1 线性范围和检出限  57
        2.3.2 进样液的稳定性  57-58
        2.3.3 准确性  58-59
      2.4 标准曲线及样品测定  59-60
        2.4.1 标准曲线和回归方程  59-60
        2.4.2 样品测定  60
    3.小结  60-61
第二部分柱切换HPLC法测定婴幼儿配方食品和保健食品中维生素B12的研究  61-88
  前言  61-63
  1.实验方法  63-70
    1.1 试剂  63
    1.2 仪器设备  63-64
    1.3 分析步骤  64-69
      1.3.1 保健食品样品前处理  64-66
      1.3.2 高效液相色谱测定  66-68
      1.3.3 标准曲线的制作  68-69
    1.4 计算  69
    1.5 标准色谱图  69-70
  2.结果与讨论  70-87
    2.1 试样前处理方法条件的研究  70-75
      2.1.1 提取溶剂的选择  70-71
      2.1.2 淀粉酶和蛋白酶的选择  71
      2.1.3 氰化钾反应条件的优化  71-72
      2.1.4 固相萃取的选用  72-75
      2.1.5 洗脱后浓缩条件的选择  75
    2.2 HPLC条件的研究  75-84
      2.2.1 柱切换中高效液相色谱柱的组合模式的选择  75-76
      2.2.2 预处理柱及分析柱的选择  76-77
      2.2.3 流动相的选择及优化  77-82
      2.2.4 流速的选择  82-83
      2.2.5 波长的选择  83-84
    2.3 方法适用性研究  84-86
      2.3.1 准确性  84-85
      2.3.2 重复性  85
      2.3.3 稳定性  85-86
    2.4 标准曲线及样品测定  86-87
      2.4.1 维生素B12标准曲线的绘制  86
      2.4.2 样品测定  86-87
  3.小结  87-88
总结和展望  88-90
  1.总结  88
  2.创新点和展望  88-90
参考文献  90-93
附录  93-109
致谢  109-110
攻读硕士期间发表文章  110-111
综述  111-123

食品中纽甜和维生素B12的柱切换HPLC法测定研究

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