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大鼠背根神经节离散神经元差速贴壁纯化及纯化培养相关因素对整节培养中β3-tubulin阳性轴突的综合影响

作　者: 李骏
导　师: 冯大雄
学　校: 泸州医学院
专　业: 外科学
关键词: 背根神经节整节培养差速贴壁胎牛血清五氟尿嘧啶阿糖胞苷
分类号: R741
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:探究:1.相对简洁有效的背根神经节神经元细胞纯化方式;2.神经元培养体系内相关因素对β3-tubulin阳性神经轴突生长状态的影响。方法:1.⑴显微操作取新生SD大鼠背根神经节,经消化,离心后制成细胞悬液;⑵在30分钟、60分钟及100分钟,分组观察PDL、PDL-LN及I型胶原蛋白三种底物组背根神经元与非神经元细胞的贴壁数量。2.⑴显微操作下取新生SD大鼠背根神经节,制成培养用组织块;⑵通过完全随机设计分组观察培养72小时后,底物、血清、有丝分裂抑制剂对背根神经节整节培养中β3-tubulin阳性轴突生长长度和分枝情况的影响。结果:1.⑴30分钟时平均每视野神经元细胞贴壁数量:PDL组为18个,PDL-LN组为25个,I型胶原蛋白组为5个;平均每视野非神经元细胞贴壁数量:PDL组为34个,PDL-LN组为31个,I型胶原蛋白组为11个,其中PDL组30分钟时相,神经元和非神经元细胞贴壁数量差异最大,差异有统计学意义(P<0.05);⑵60分钟时平均每视野神经元细胞贴壁数量:PDL组为58个,PDL-LN组为89个,I型胶原蛋白组为55个;平均每视野非神经元细胞贴壁数量:PDL组为40个,PDL-LN组为37个,I型胶原蛋白组为40个,其中PDL-LN组两类细胞贴壁数量差异有统计学意义(P<0.05),但贴壁神经元细胞数大于非神经元细胞数;⑶100分钟时平均每视野神经元细胞贴壁数量:PDL组为236个,PDL-LN组为360个,I型胶原蛋白组为136个;平均每视野非神经元细胞贴壁数量:PDL组为107个,PDL-LN组为60个,I型胶原蛋白组为77个,三组差异均有统计学意义(P<0.05),但神经元细胞贴壁数大于非神经元细胞贴壁数。2. DRG整节培养72小时后:⑴底物水平为PDL-LN时轴突生长分化情况最好,单位末梢数量均值为0.243个/微米,轴突长度均值为1626.40微米,与PDL水平和I型胶原蛋白水平相比差异有统计学意义;⑵血清浓度为5%时单位末梢数量最大,为0.250个/微米,但轴突长度在0%、5%和10%三个浓度水平上没有统计学差异(P>0.05);⑶5-FU在0浓度水平时所得阳性轴突末梢数最多,为0.253个/微米,轴突长度在0浓度时为1612.02±603.21微米,比20μmol/L和40μmol/L浓度水平均长,差异有统计学意义(P<0.05);④Ara-C在0浓度和10μmol/L浓度水平所得阳性轴突末梢数相当,均为0.192个/微米,高于20μmol/L水平组的0.127个/微米,而轴突长度在10μmol/L水平时最长,为1610.90±812.05微米,与0浓度和20μmol/L浓度相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.将离散背根神经节细胞悬液在PDL包被的玻片上差速贴壁30分钟,再将悬液吸出进行接种培养,可以在一定程度上起到分离纯化神经元细胞的作用。2.在进行DRG整节培养时,选择神经元专用培养基+PDL-LN细胞培养底物+10μmol/L Ara-C的培养因素组合,可获得最理想的β3-tubulin阳性轴突生长分化效果。

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1 大鼠背根神经节离散神经元差速贴壁纯化及纯化培养相关因素对整节培养中β3-tubulin 阳性轴突的综合影响  4-45
  1.1 英汉缩略词对照表  4-5
  1.2 中文摘要  5-7
  1.3 英文摘要  7-10
  1.4 前言  10-12
  1.5 材料与方法  12-22
  1.6 结果  22-31
  1.7 讨论  31-39
  1.8 结论  39-40
  1.9 参考文献  40-45
2 致谢  45-46
3 神经元培养中的影响因素（综述）  46-66
4 在读期间发表的论文  66-73

大鼠背根神经节离散神经元差速贴壁纯化及纯化培养相关因素对整节培养中β3-tubulin阳性轴突的综合影响

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